[發明專利]適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法

在審

• 申請號: 202010934820.3
• 申請日: 2020-09-08
• 公開（公告）號: CN112033957A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 邢海波;費雪蓮;鄭博文;李欣悅;谷佳宇;胡曉鈞
• 申請（專利權）人: 上海應用技術大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/77;G01N21/33;G01N1/28;B82Y5/00;B82Y15/00;B82Y40/00
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 吳文濱

1.適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1)制備包含核酸適配體包裹的納米金顆粒、TMB、H₂O₂的檢測液；

2)對牛奶樣品進行前處理；

3)將前處理后的牛奶樣品與步驟1)中的檢測液混合，得到混合液，根據混合液顏色的變化和/或吸光度的變化，判斷牛奶樣品中環丙氨嗪的含量；

步驟1)中，所述的核酸適配體的序列為5’-GGTTGGTTGGTTGGTTTT-3’。

2.根據權利要求1所述的適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，其特征在于，步驟1)中，所述的納米金顆粒的粒徑為15-20nm。

3.根據權利要求1所述的適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，其特征在于，步驟1)中，所述的檢測液的制備方法為：將核酸適配體溶液、納米金顆粒溶液混合后，在28-32℃下反應25-35min，得到核酸適配體包裹的納米金顆粒，之后加入TMB溶液、H₂O₂溶液并充分混合均勻。

4.根據權利要求3所述的適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，其特征在于，所述的核酸適配體溶液的濃度為35-45nmol/L，所述的TMB溶液的濃度為200-240nmol/L，所述的H₂O₂溶液的濃度為210-270mmol/L。

5.根據權利要求1所述的適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，其特征在于，步驟2)中，牛奶樣品的前處理過程為：將牛奶樣品與醋酸混合后靜置3-8min，之后離心并取上清液，再調節pH至7.5-8.5。

6.根據權利要求1所述的適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，其特征在于，步驟3)中，利用紫外分光光度計測定混合液的吸光度，并根據環丙氨嗪標準曲線得到牛奶樣品中環丙氨嗪含量。

7.根據權利要求6所述的適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，其特征在于，所述的環丙氨嗪標準曲線的繪制過程為：

3-1)將不同濃度的環丙氨嗪標準液分別加入至多個容器中，并在每個容器中加入步驟1)中的檢測液，混合均勻后反應10-20min；

3-2)利用紫外分光光度計分別測定步驟3-1)中各溶液在520nm和650nm處的吸光度值，并計算二者比值，即A_650/520；

3-3)以不同濃度的環丙氨嗪與相應的A_650/520作圖，繪制出環丙氨嗪標準曲線。

8.根據權利要求7所述的適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，其特征在于，根據混合液的A_650/520，在環丙氨嗪標準曲線上查得牛奶樣品中環丙氨嗪含量。

9.根據權利要求1所述的適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，其特征在于，步驟3)中，將混合液置于96孔板中，根據混合液顏色的變化判斷牛奶樣品中環丙氨嗪的含量。

10.根據權利要求1所述的適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，其特征在于，所述的牛奶中，環丙氨嗪的含量為0-0.5ppm。