[發明專利]適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法

在審

• 申請號: 202010934820.3
• 申請日: 2020-09-08
• 公開（公告）號: CN112033957A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 邢海波;費雪蓮;鄭博文;李欣悅;谷佳宇;胡曉鈞
• 申請（專利權）人: 上海應用技術大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/77;G01N21/33;G01N1/28;B82Y5/00;B82Y15/00;B82Y40/00
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 吳文濱

本發明涉及一種適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，該方法包括以下步驟：1)制備包含核酸適配體包裹的納米金顆粒、TMB、H₂O₂的檢測液；2)對牛奶樣品進行前處理；3)將前處理后的牛奶樣品與步驟1)中的檢測液混合，得到混合液，根據混合液顏色的變化和/或吸光度的變化，判斷牛奶樣品中環丙氨嗪的含量；步驟1)中，核酸適配體的序列為5’?GGTTGGTTGGTTGGTTTT?3’。本發明利用核酸適配體修飾納米金催化四甲基聯苯胺/雙氧水迅速變色的特性，開發出一種生物傳感器比色法，通過肉眼及紫外分光光度計檢測牛奶中環丙氨嗪，本發明操作簡便，前處理簡單，不需要大型儀器，靈敏度高，可用于牛奶中環丙氨嗪的檢測。

技術領域

本發明屬于牛奶中環丙氨嗪檢測技術領域，涉及一種利用核酸適配體修飾的納米金顆粒催化TMB/H₂O₂，通過肉眼/紫外吸收光譜檢測牛奶中環丙氨嗪的方法。

背景技術

環丙氨嗪(Cyromazine，Cyr)的化學名為2-環丙胺基-4,6-二氨基三嗪，與阿特拉津、西瑪津、莠滅津、撲滅津等同屬三嗪類或均三氮苯化合物，是一種高效抑制昆蟲生長劑、殺寄生蟲類殺蟲劑，在畜禽養殖過程中作為飼料添加劑使用。研究表明環丙氨嗪進入動物體內絕大部分以原藥或代謝物形式通過奶或者糞尿排泄，隨后再經由畜禽糞便暴露在土壤和水環境中。土壤或水環境中的環丙氨嗪通過環境轉歸再次進入食物鏈，對不同營養級生物和人體的健康造成潛在隱患。環丙氨嗪在動物和植物體內經脫烷基化作用代謝為三聚氰胺(Melamine，Mel)，而三聚氰胺的主要代謝產物為三聚氰酸(Cyanuric acid，CA)、三聚氰酸一酰胺(Ammelide，Amd)和三聚氰酸二酰胺(Ammeline，Amn)。長期攝入三聚氰胺會導致膀胱結石，使膀胱癌的發生率明顯提高。

根據環丙氨嗪及其代謝產物三聚氰胺在食品中的限量標準要求，目前常用于環丙氨嗪及其代謝產物殘留檢測的方法有容量分析法；色譜分析方法，包括高效液相色譜法；免疫化學分析法；光學分析法等。在GB 29704-2013中采用超高效液相色譜-串聯質譜法來測定動物性食品中環丙氨嗪的殘留。這些方法一般需要進行復雜的樣品前處理，儀器價格昂貴，檢測成本高，且方法操作復雜，需要經過專門訓練的人員才能操作，不能完全滿足對牛奶中環丙氨嗪殘留快速篩查的檢測需要。

發明內容

本發明的目的就是為了提供一種利用核酸適配體包裹的納米金顆粒催化TMB/H₂O₂迅速變色所產生的溶液顏色變化，來檢測牛奶中環丙氨嗪(Cyr)的方法。其中，核酸適配體(Apt)通過共價鍵作用包裹納米金(AuNPs)顆粒，可以模擬過氧化物酶的催化活性催化四甲基聯苯胺/雙氧水(TMB/H₂O₂)發生顯色反應，形成穩定檢測液。本發明方法具有高靈敏度、選擇性好、低成本等優勢。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

適配體包裹AuNPs催化TMB/過氧化氫檢測牛奶中環丙氨嗪的方法，該方法包括以下步驟：

1)制備包含核酸適配體包裹的納米金顆粒、TMB、H₂O₂的檢測液；

2)對牛奶樣品進行前處理；

3)將前處理后的牛奶樣品與步驟1)中的檢測液混合，得到混合液，根據混合液顏色的變化和/或吸光度的變化，判斷牛奶樣品中環丙氨嗪的含量；

步驟1)中，所述的核酸適配體的序列為5’-GGTTGGTTGGTTGGTTTT-3’。

進一步地，步驟1)中，所述的納米金顆粒的粒徑為15-20nm。