[發明專利]檢測大腸桿菌內氟含量的方法

有效

• 申請號: 202010934124.2
• 申請日: 2020-09-08
• 公開（公告）號: CN112034021B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 王玉花;武子辰;邢安琪;徐曉寒;田志強;房婉萍;朱旭君;馬媛春
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/333;G01N21/33
• 代理公司: 南京華恒專利代理事務所(普通合伙) 32335
• 代理人: 裴素艷

1.一種檢測大腸桿菌內氟含量的方法，其特征在于：所述檢測大腸桿菌內氟含量的方法包括以下步驟：

1)配制含有不同濃度氟的LB液體培養基；

2)分別向步驟1)配置得到的含有不同濃度氟的LB液體培養基中加入野生型大腸桿菌菌株并振蕩培養；

3)紫外檢測在含有不同濃度氟的LB液體培養基中野生型大腸桿菌生長的OD600值；

4)分別收集步驟3)中培養的菌液后離心，倒掉上清液，重懸浮再離心后倒掉上清液后再重懸浮，水浴加熱，冷卻后離心；

5)取步驟4)中最后得到的上清液，用氟離子選擇性電極進行測定，得到氟離子濃度C；

6)將步驟3)檢測得到的OD600值以及步驟5)測定得到的氟離子濃度C代入如下公式，計算得到野生型大腸桿菌內累積的氟含量；

其中：

C是氟離子選擇性電極測定得到的氟離子濃度，單位是ppm；

V是步驟4)中最后一次重懸浮所采用的去離子水的體積，單位mL；

OD是步驟3)檢測得到野生型大腸桿菌生長的OD600值。

2.根據權利要求1所述的檢測大腸桿菌內氟含量的方法，其特征在于：所述步驟1)的具體實現方式是：

1.1)配制LB液體培養基，所述LB液體培養基的成分及含量是：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化鈉10g/L；

1.2)向步驟1.1)中加入不同濃度的氟離子，配制成氟離子濃度分別為0mM、15mM、25mM、50mM的含氟的LB液體培養基；

1.3)調節pH＝7.0～7.4，120℃滅菌20min，冷卻至40～50℃后得到含有不同濃度氟的LB液體培養基。

3.根據權利要求2所述的檢測大腸桿菌內氟含量的方法，其特征在于：所述步驟2)中野生型大腸桿菌菌株與含有不同濃度氟的LB液體培養基的比例是1：100～1000；所述步驟2)中振蕩培養的條件是恒溫37℃、200～220rpm下振蕩培養10h。

4.根據權利要求3所述的檢測大腸桿菌內氟含量的方法，其特征在于：所述步驟4)的具體實現方式是：

4.1)分別收集步驟3)中培養的菌液后離心，在25℃以及4000r/min的條件下離心15min，倒掉上清液；

4.2)加入去離子水重懸浮底部的菌塊，在25℃以及4000r/min的條件下離心15min，倒掉上清液；

4.4)加入去離子水重懸浮底部的菌塊，在100℃下水浴加熱30min，待冷卻至室溫后，在25℃以及4000r/min的條件下離心15min。

5.根據權利要求4所述的檢測大腸桿菌內氟含量的方法，其特征在于：所述步驟4.2)和步驟4.4)之間還包括：

4.3)重復步驟4.2)兩次。

6.根據權利要求5所述的檢測大腸桿菌內氟含量的方法，其特征在于：所述步驟5)的具體實現方式是：

取步驟4.4)中得到的上清液，以1：1的比例加入氟離子強度緩沖液，充分混合后，用氟離子選擇性電極進行測定，得到氟離子濃度C。

7.根據權利要求1-6任一項所述的檢測大腸桿菌內氟含量的方法，其特征在于：所述步驟3)中所采用的紫外分光光度計型號是MAPADA P4。

8.根據權利要求7所述的檢測大腸桿菌內氟含量的方法，其特征在于：所述步驟5)中所采用的氟離子選擇性電極型號是Thermo Orin 9609BNWP。