[發明專利]一種純化學亞硫酸鉍瓊脂培養基及其應用

在審

• 申請號: 202010933892.6
• 申請日: 2020-09-08
• 公開（公告）號: CN112126670A
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 周正;崔生輝;周亮;馮軍燕;王世飛
• 申請（專利權）人: 遵義醫科大學
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12N1/02;C12N1/20;C12R1/42
• 代理公司: 遵義市創先知識產權代理事務所(普通合伙) 52118
• 代理人: 劉創先

本發明公開了一種純化學亞硫酸鉍瓊脂培養基及其應用，屬于醫學和生物學技術領域，是用已知的純化學試劑配制的培養基，其配方中成分明確，質量可控，具有更高的準備性和可重復性；從而避免了蛋白胨牛肉膏制作過程復雜，質量難以控制，時而會影響實驗結果的問題，本發明提供的一種純化學亞硫酸鉍瓊脂培養基及其應用，根據成分合成的培養基可用于醫藥、食品、環境、廢水、醫院等不同領域用于沙門氏菌特別是傷寒沙門氏菌的選擇性分離。

技術領域

本發明涉及醫學和生物學技術領域，具體為一種純化學亞硫酸鉍瓊脂培養基及其應用。

背景技術

沙門氏菌是目前世界上最常見的食源性病原菌之一，全球每年因沙門氏菌引發的食品中毒事件位居細菌性中毒事件首位。在我國細菌性食物中毒中，有70-80％是由沙門氏菌引起的，絕大多數污染源來自畜禽及其糞便、蛋類和水。為確保食品供應安全，減少沙門氏菌的發生概率，有效的檢測方法至關重要；而食源性致病菌的檢測方法主要包括傳統培養法和免疫學方法，其中，免疫學方法是建立在抗原抗體特異性結合基礎上的新興技術，但由于靈敏性不足，常常出現假陰性結果，容易漏篩，檢測效果無法與培養法相媲美。因此，目前絕大多數檢測機構仍然使用傳統培養方法檢測食源致病微生物。

目前，商品培養基的使用越來越廣泛，其生產廠家數量較多，國外有德國默克、英國OXOID、法國梅里埃、美國BD，國內有北京三藥、北京陸橋、北京奧博星、廣東環凱等，但市售培養基包含動物源成分的生物培養基，為微生物生長提供碳源、氮源、維生素、生長因子的動物源成分，最常見的是胰蛋白胨和牛肉膏；由于動物源性成分制作過程復雜，質量難以控制，時而會影響實驗結果。這些成分受不同生產廠家或不同批次等因素的影響，品質差距較大、質量也不穩定，導致市售生物培養基質量良莠不齊，直接影響了微生物檢測和研究結果的準確性、可重復性和可靠性。因此，研發質量可控的參考培養基，加強培養基的質量控制十分重要。

發明內容

本發明的目的在于克服上述背景技術困難，提供一種純化學亞硫酸鉍瓊脂培養基及其應用。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案為：一種純化學亞硫酸鉍瓊脂培養基，其特征在于，所含成分及質量濃度如下：

進一步，一種如權利要求1所述純化學亞硫酸鉍瓊脂培養基的配制方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制作母液

按成分稱取10倍濃度的氨基酸和維生素，分別溶于200mL蒸餾水中，制成氨基酸母液和維生素母液；同樣的方法稱取無機鹽，先將氯化鉀、磷酸氫二鈉和硫酸鎂溶于200mL蒸餾水中，混合均勻后再加入四水硝酸鈣，攪拌均勻后制成無機鹽母液；

(2)制作替代物

分別取步驟(1)中氨基酸母液20mL、維生素母液20mL和無機鹽母液20mL，混勻，制備成牛肉膏和蛋白胨替代物；

(4)制作培養基

取葡萄糖1g、硫酸亞鐵0.06g、磷酸氫二鈉0.8g、亞硫酸鈉1.2g、檸檬酸鉍銨0.4g、0.1％煌綠5支和瓊脂3.8g，先將步驟(2)與葡萄糖混勻溶解，再將硫酸亞鐵、檸檬酸鉍銨、磷酸氫二鈉、亞硫酸鈉分別加入10mL蒸餾水，加熱攪拌溶解，同時100mL蒸餾水與瓊脂攪拌煮沸溶解；最后混勻硫酸亞鐵、檸檬酸鉍銨、磷酸氫二鈉、亞硫酸鈉溶液后傾倒入步驟(2)中，混勻后立即與煮沸的瓊脂攪拌，待溶液冷卻到50-60℃時將pH調至7.5迅速倒入0.1％煌綠5支，混合均勻后既得自制的200mL亞硫酸鉍瓊脂純化學成分合成培養基，傾注平板備用。

進一步，用于培養大腸埃希氏桿菌CMCC44102、鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028和傷寒沙門菌CMCC50071。