[發(fā)明專利]基于共振能量轉(zhuǎn)移的電化學(xué)發(fā)光法檢測己烯雌酚的傳感器及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010932340.3
• 申請日: 2020-09-08
• 公開（公告）號: CN112114018B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇暢;單學(xué)凌;陳智棟
• 申請（專利權(quán)）人: 常州大學(xué)
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48;G01N21/76
• 代理公司: 常州市英諾創(chuàng)信專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32258
• 代理人: 王志慧

1.一種基于共振能量轉(zhuǎn)移的電化學(xué)發(fā)光法檢測己烯雌酚的傳感器，其特征在于：包括作為能量共振轉(zhuǎn)移中的供體Ag₃PO₄/Cu-MOF復(fù)合材料，作為能量共振轉(zhuǎn)移中的受體的AgNPs，所述Ag₃PO₄/Cu-MOF復(fù)合材料和Ag NPs之間通過兩條DNA鏈連接并共同修飾在玻碳電極上，其中一條DNA鏈為適配體（apt），另一條DNA鏈連接受體，得到Ag NPs-cDNA/apt/ Ag₃PO₄/Cu-MOF /GCE傳感器；

傳感器制備方法為：

（1）Ag₃PO₄/Cu-MOF復(fù)合材料的制備：

分別制備Ag₃PO₄和新型Cu-MOF；將制得的新型Cu-MOF和Ag₃PO₄加入溶劑中，超聲分散均勻后，再在磁力攪拌器中攪拌，攪拌完成后離心分離并分別用有機(jī)溶劑和去離子水洗滌，再經(jīng)干燥制得黃灰色粉末，即Ag₃PO₄/Cu-MOF復(fù)合材料，并將Ag₃PO₄/Cu-MOF復(fù)合材料分散在DMF中以備使用；

其中新型Cu-MOF制備方法為：將五水合硫酸銅（CuSO₄·5H₂O）和4-（3-羧基-1,2,4-H-三唑-1-基）苯甲酸（H₂L）加入N,N-二甲基乙酰胺（DMF）與乙腈的混合溶液中，超聲攪拌混合均勻，將得到的藍(lán)色乳狀液體倒入聚四氟乙烯作襯里不銹鋼高壓釜內(nèi)反應(yīng)，反應(yīng)完成后，將產(chǎn)物離心并洗滌、干燥后得到藍(lán)色粉末，即新型Cu-MOF；

（2）Ag NPs-cDNA膠體溶液的制備:

將含有cDNA的Tris-H₃PO₄溶液加入體積含量為50%的Ag NPs水溶液中，靜置反應(yīng)后，離心并取沉淀加入Tris- H₃PO₄，控制pH為7.5，經(jīng)超聲處理，并在室溫下震蕩，制得Ag NPs-cDNA膠體溶液，Ag NPs-cDNA膠體溶液于低溫下儲存?zhèn)溆茫凰鯿DNA為用于連接受體的DNA鏈；

（3）基于共振能量轉(zhuǎn)移的電化學(xué)發(fā)光傳感器的制備：

將含有NHS和EDC的PBS緩沖液涂滴在干凈的裸玻碳電極上，獲得活化的玻碳電極，隨后，將步驟（1）制得的所述Ag₃PO₄/Cu-MOF復(fù)合材料的DMF分散液滴加在活化的玻碳電極上，得到Ag₃PO₄/Cu-MOF/GCE修飾電極；然后，再涂滴含有NHS和EDC的PBS緩沖液于Ag₃PO₄/Cu-MOF/GCE修飾電極上，活化新型Cu-MOF中的羧基；最后，依次滴涂含有適配體（apt）的Tris-H₃PO₄溶液和Ag NPs-cDNA膠體溶液，得到所述基于共振能量轉(zhuǎn)移的電化學(xué)發(fā)光傳感器AgNPs-cDNA/apt/ Ag₃PO₄/Cu-MOF /GCE；所述適配體為用于連接供體的DNA鏈。

2.如權(quán)利要求1所述的基于共振能量轉(zhuǎn)移的電化學(xué)發(fā)光法檢測己烯雌酚的傳感器，其特征在于：適配體如下所示：

適配體核苷酸序列: 5'-GGC GAT GGG GTA GGG GGT GTG GAG GGG CCG GAC GGA GGGG NH₂-3'；

cDNA序列：SH-(CH)₂-5'-CCC-CTC-CGT-CCG-GCC-CCT-CCA-3'。