[發(fā)明專利]雙鼠李糖脂生產(chǎn)菌株、構(gòu)建方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010924374.8
• 申請(qǐng)日: 2020-09-04
• 公開（公告）號(hào): CN112941001A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳玲;汪江林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海恒什生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/90;C12N1/38;C12P19/44;C12R1/385
• 代理公司: 上海科律專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 31290
• 代理人: 葉鳳

1.一株能夠高效生產(chǎn)高純度的雙鼠李糖脂的生產(chǎn)菌株P(guān)D2，其特征在于，其基因型為PAO1 araC-ParaC-ParaB-rhlAB::PcsiE-rhlC::Tn9。

2.一種獲得權(quán)利要求1菌株P(guān)D2的重組方法，其特征在于，以銅綠假單胞菌模式菌株P(guān)AO1作為出發(fā)菌株，利用同源重組的方法將rhlAB基因簇的啟動(dòng)子替換為L(zhǎng)-阿拉伯糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，由于L-阿拉伯糖既可以作為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)基因的表達(dá)，同時(shí)可以作為碳源被菌體利用，保證rhlAB基因簇在菌體發(fā)酵至生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期時(shí)啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄并被菌體代謝；利用同源重組的方法將rhlC基因啟動(dòng)子替換為菌株生長(zhǎng)穩(wěn)定期誘導(dǎo)的啟動(dòng)子，保證發(fā)酵進(jìn)入菌體生長(zhǎng)穩(wěn)定期后表達(dá)rhlC基因，將單鼠李糖脂轉(zhuǎn)化為雙鼠李糖脂；

以獲得專一性生產(chǎn)雙鼠李糖脂的銅綠假單胞菌菌株，菌株命名為PD2。

3.一種由權(quán)利要求1菌株P(guān)D2發(fā)酵生產(chǎn)雙鼠李糖脂的方法。

4.如權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，在發(fā)酵至12-36小時(shí)，添加終濃度為0.01-0.5％的L-阿拉伯糖，其它發(fā)酵過程參照傳統(tǒng)銅綠假單胞菌一樣的過程及控制條件下即可發(fā)酵生產(chǎn)鼠李糖脂。

5.一種突變菌株，其特征在于，基于權(quán)利要求1菌株通過誘變獲得，高效生產(chǎn)高純度的雙鼠李糖脂的生產(chǎn)菌株P(guān)D08，該菌株保藏至武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，微生物保藏號(hào)為CCTCC M 2020376。

6.一種由權(quán)利要求5菌株P(guān)D08發(fā)酵生產(chǎn)雙鼠李糖脂的方法。

7.如權(quán)利要求6所述方法，其特征在于，在發(fā)酵至12-36小時(shí)，添加終濃度為0.01-0.5％的L-阿拉伯糖，其它發(fā)酵過程參照傳統(tǒng)銅綠假單胞菌一樣的過程及控制條件下即可發(fā)酵生產(chǎn)鼠李糖脂。