[發(fā)明專利]一種降低黃酒中氨基甲酸乙酯含量的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010922066.1 | 申請日： | 2020-09-04 |
| 公開（公告）號： | CN112111417A | 公開（公告）日： | 2020-12-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 吳殿輝;陸健;謝文娟;李曉敏;蔡國林 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/19 | 分類號： | C12N1/19;C12N15/55;C12N15/31;C12G3/022;C12R1/865 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 降低 黃酒 氨基 甲酸 含量 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種降低黃酒中氨基甲酸乙酯含量的方法，屬于基因工程以及發(fā)酵工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種低產(chǎn)尿素和氨基甲酸乙酯的重組釀酒酵母S.cerevisiae NaDUR1,2/DUR3?Δcar1，此重組釀酒酵母以釀酒酵母Na為宿主，敲除編碼精氨酸酶的基因CAR1，并且，高效表達(dá)編碼脲基酰胺酶的基因DUR1,2和編碼尿素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因DUR3；使用此重組釀酒酵母生產(chǎn)得到黃酒發(fā)酵液中，尿素的含量低至3.0mg/L，分別較釀酒酵母Na和出發(fā)菌株S.cerevisiae NaDUR1,2?Δcar1降低了92.1％和43.4％。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種降低黃酒中氨基甲酸乙酯含量的方法，屬于基因工程以及發(fā)酵工程技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate，EC)是一種潛在致癌物，可導(dǎo)致肺癌、淋巴癌、肝癌和皮膚癌等疾病，被國際癌癥研究機(jī)構(gòu)(International agency for research oncancer，IARC)列為2A類致癌物質(zhì)。
氨基甲酸乙酯廣泛存在于腐乳、醬油等發(fā)酵食品及清酒、黃酒、葡萄酒、威士忌、白蘭地等酒精飲品中。其中，酒精飲品是人體攝入氨基甲酸乙酯的主要來源，加拿大和捷克等國家紛紛對市場上各類酒精飲品中氨基甲酸乙酯的含量規(guī)定了限量標(biāo)準(zhǔn)。2012年，中國香港消費(fèi)者委員會(huì)關(guān)于市售酒精飲品中氨基甲酸乙酯含量的調(diào)查結(jié)果顯示，16種黃酒產(chǎn)品中均含有氨基甲酸乙酯，含量最高達(dá)到260μg/L，引起了黃酒生產(chǎn)企業(yè)和消費(fèi)者的高度重視。
因此，急需找到一種降低黃酒中氨基甲酸乙酯含量的方法以提高黃酒的飲用安全性。
發(fā)明內(nèi)容
[技術(shù)問題]
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種降低黃酒中氨基甲酸乙酯含量的方法。
[技術(shù)方案]
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種重組釀酒酵母，所述重組釀酒酵母以釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)為宿主，敲除編碼精氨酸酶的基因CAR1，并且，表達(dá)編碼脲基酰胺酶的基因DUR1,2和編碼尿素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因DUR3。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Na。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述編碼精氨酸酶的基因CAR1的核苷酸序列如SEQID No.1所示。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述編碼脲基酰胺酶的基因DUR1,2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述編碼尿素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因DUR3的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
本發(fā)明還提供了一種降低黃酒中氨基甲酸乙酯含量的方法，所述方法為以上述重組釀酒酵母作為酒母，將釀酒原料經(jīng)浸米、蒸飯、冷卻、拌曲后，將酒母接種到釀酒原料中，經(jīng)前酵、后酵、過濾澄清，得到黃酒。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述方法包含如下步驟：
(1)浸米：取糯米，加水浸過米層進(jìn)行浸泡，得到浸好的糯米；
(2)蒸煮：蒸煮浸好的糯米，至內(nèi)無白心、顆粒均勻、軟而不爛、熟而不黏，得到蒸熟的糯米；
(3)拌曲：將蒸熟的糯米冷卻、攤涼后，添加生麥曲和熟麥曲攤拌均勻，得到拌好的糯米；
(4)前酵：將拌好的糯米與水和酒母混合后進(jìn)行靜置發(fā)酵，得到發(fā)酵物A；
(5)后酵：前酵結(jié)束后，將發(fā)酵物A繼續(xù)靜置發(fā)酵15d，得到發(fā)酵物B；
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