[發(fā)明專利]一種可連續(xù)收獲且無(wú)需酶消化的2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010917991.5
• 申請(qǐng)日: 2020-09-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112210536A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李順;劉貽堯;李亭亭;秦翔;楊紅;吳春惠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 電子科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09;C12N5/071;C12N5/00;C12Q1/02
• 代理公司: 北京正華智誠(chéng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11870
• 代理人: 李林合

1.一種構(gòu)建可連續(xù)收獲且無(wú)需酶消化的2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備帶有微陣列圖案的印章；

(2)在印章表面滴加胞外基質(zhì)蛋白工作液，孵育30～60min后，于50～60℃烘干，然后加壓使印章與培養(yǎng)基底底部接觸5～10min，使培養(yǎng)基底帶有微陣列圖案，再封閉微陣列圖案中不含細(xì)胞外基質(zhì)的位點(diǎn)；

(3)向步驟(2)所得培養(yǎng)基底中以1.0～5.0×10⁴個(gè)/mL的密度接種細(xì)胞，然后35～37℃，5～10％CO₂培養(yǎng)至90％以上的微陣列團(tuán)中均有細(xì)胞貼壁后，更換新鮮培養(yǎng)基；

(4)于37℃繼續(xù)培養(yǎng)3～5天后，即可獲得2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建可連續(xù)收獲且無(wú)需酶消化的2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，所述帶有微陣列圖案的印章的制備過(guò)程為：

利用UV光刻制備具有面積大小為40-10000μm²的微圖案陣列，然后使用道康寧184倒模，即可制備得到PDMS印章，清洗備用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建可連續(xù)收獲且無(wú)需酶消化的2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，所述胞外基質(zhì)蛋白工作液為濃度為2～200μg/mL的纖連蛋白工作液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建可連續(xù)收獲且無(wú)需酶消化的2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，所述步驟(2)中使用兩親性共聚物封閉微陣列圖案中不含細(xì)胞外基質(zhì)的位點(diǎn)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的構(gòu)建可連續(xù)收獲且無(wú)需酶消化的2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，所述兩親性共聚物為濃度為0.1％-10％的泊洛沙姆F-127。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的構(gòu)建可連續(xù)收獲且無(wú)需酶消化的2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，所述泊洛沙姆F-127的濃度為1％。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建可連續(xù)收獲且無(wú)需酶消化的2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基底中接種的細(xì)胞密度為10000個(gè)/mL。

8.權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述方法構(gòu)建得到的2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系。

9.權(quán)利要求8所述的2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系在腫瘤藥物測(cè)試中的應(yīng)用。

10.權(quán)利要求8所述的2D、3D細(xì)胞共培養(yǎng)體系中的3D細(xì)胞微球陣列在高通量藥物測(cè)試中的應(yīng)用。