[發明專利]一種蛋白核小球藻葉綠體轉基因系統及其應用

有效

• 申請號: 202010917692.1
• 申請日: 2020-09-03
• 公開（公告）號: CN112226452B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 李雁群;符虹宇;梁皓輝;楊青峰;朱宏波;簡紀常;胡雪瓊
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C12N15/79
• 分類號: C12N15/79;C12N1/13;C12R1/89
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 劉瑤云;陳偉斌

1.一種蛋白核小球藻葉綠體轉基因系統，其特征在于，包含SEQ ID NO:1所示核苷酸序列中不小于1000bp的連續片段作為上游同源臂和下游同源臂，及插入上游同源臂和下游同源臂之間的啟動子、終止子和外源基因；所述上游同源臂和下游同源臂的序列如SEQ IDNO:2所示；所述上下游同源臂間還插入有篩選標記基因。

2.根據權利要求1所述的蛋白核小球藻葉綠體轉基因系統，其特征在于，所述系統依次含上游同源臂、至少一個啟動子、至少一個外源基因、篩選標記基因、至少一個終止子和下游同源臂。

3.根據權利要求1或2所述的蛋白核小球藻葉綠體轉基因系統，其特征在于，所述啟動子選自來源于萊茵衣藻的atpA啟動子、rbcL啟動子或psbA啟動子。

4.根據權利要求1或2所述的蛋白核小球藻葉綠體轉基因系統，其特征在于，所述終止子選自來源于萊茵衣藻的psbA終止子。

5.根據權利要求1或2所述的蛋白核小球藻葉綠體轉基因系統，其特征在于，所述篩選標記基因為aadA基因。

6.根據權利要求1所述的蛋白核小球藻葉綠體轉基因系統，其特征在于，所述外源基因根據如下所述密碼子偏好性進行優化：Phe(TTC)、Leu(TTA)、Ile(ATC)、Val(GTA)、Ser(TCT)、Pro(CCA)、Thr(ACT)、Ala(GCT)、Tyr(TAC)、Gln(CAA)、Asn(AAC)、Asp(GAC)、Glu(GAG)、Cys(TGT)、Arg(CGT)、Gly(GGT)。

7.權利要求1～6任一所述的蛋白核小球藻葉綠體轉基因系統在構建轉基因蛋白核小球藻中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，利用蛋白核小球藻葉綠體轉基因系統將外源基因導入蛋白核小球藻細胞，經培養篩選獲得轉基因蛋白核小球藻。