[發明專利]一種血漿中煙堿及其主要代謝物的手性分析方法

有效

• 申請號: 202010914265.8
• 申請日: 2020-09-03
• 公開（公告）號: CN111983110B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 韓書磊;金光祥;陳歡;王紅娟;付亞寧;郭溪香;劉彤;侯宏衛;胡清源
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 侯淑紅

本發明涉及一種血漿中煙堿及其主要代謝物的手性分析方法，該方法包括如下步驟：(1)取血漿加入內標萃取溶液以沉淀蛋白，振蕩，離心，得上清液；(2)取步驟(1)得到的上清液進行高效液相色譜?串聯質譜(HPLC?MS/MS)分析；(3)采用內標標準曲線法定量計算樣品中目標物的含量。該方法實現了煙堿及其主要代謝物的同時手性分析，具有通量高、分離度好、操作簡便、靈敏度高、回收率及重復性好等優點，適合血漿樣本中煙堿及其主要代謝物的手性分析。

技術領域

本發明屬于化學分析技術領域，具體涉及一種血漿中煙堿及其主要代謝物的手性分析方法。

背景技術

煙堿是煙草及煙草制品具有潛在致癮性的決定性因素和主要藥理活性物質，其在動物及人體內可以很快地代謝成各種產物，主要代謝產物有可替寧、降可替寧、可替寧氮氧化物等。煙堿、可替寧、降可替寧和可替寧氮氧化物都有兩個對映異構體：S-煙堿、R-煙堿，S-可替寧、R-可替寧，S-降可替寧、R-降替寧和S-可替寧氮氧化物、R-可替寧氮氧化物。對映異構體雖然分子式相同，但結構不同，因此其代謝機理和生物活性一般具有較大的差異。生物樣本中對映異構體的手性分析是研究目標物藥理學及毒性等生理作用的關鍵，因此，建立血漿樣本中煙堿及其代謝物的高通量、高靈敏度、高選擇性的手性分離方法對煙堿的代謝、積累及吸煙與健康研究具有重要意義。

目前，煙堿及其代謝物的手性分離的方法主要有液相色譜(LC)法、液相色譜-質譜聯用法(LC-MS/MS)、超臨界流體色譜(SFC)法、氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)法、毛細管電泳(CE)法等，而液相色譜-串聯質譜法(LC-MS/MS)具有快速、靈敏、重現性好、通量高等優點，在生物堿手性分離方面有廣闊的應用前景。但是，相關研究主要為煙草及煙草制品，極少涉及生物樣品，且沒有同時實現血漿樣本中煙堿及其主要代謝物可替寧、降可替寧、可替寧氮氧化物等的手性分離(Drug Test.Anal.2017,9(6),944-948.Talanta 2018,181,132-141.Heliyon.2019,5(5),e01719.)

發明內容

本發明的目的正是基于上述技術不足，建立了一種血漿中煙堿及其主要代謝物的手性分析方法，該方法使用HPLC-MS/MS技術，首次實現了血漿樣本中煙堿、可替寧、降可替寧、可替寧氮氧化物的同時手性分離，具有通量高、分離度好、操作簡便、靈敏度高、回收率及重復性好等優點，適合血漿樣品中煙堿及其主要代謝物的手性分析。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一種血漿中煙堿及其主要代謝物的手性分析方法，該方法包括如下步驟：

(1)取血漿，加入內標萃取溶液以沉淀蛋白，振蕩，離心，得上清液；

(2)取步驟(1)得到的上清液進行高效液相色譜-串聯質譜(HPLC-MS/MS)分析；

(3)采用內標標準曲線法定量計算樣品中目標物的含量。

優選地，在步驟(1)中，所述內標萃取溶液為各內標的甲醇溶液。

優選地，在步驟(1)中，所述內標萃取溶液濃度為20～50ng/mL。

優選地，在步驟(1)中，所述離心的溫度為2～5℃。

優選地，在步驟(1)中，所述離心的速度為10000～15000rpm。

優選地，在步驟(2)中，所述高效液相色譜-串聯質譜分析的色譜條件包括：色譜柱為Chiralpak IG-3色譜柱(250×4.6mm×3μm)聯合保護柱(10mm×4.0mm×3μm)。

優選地，在步驟(2)中，所述高效液相色譜-串聯質譜分析的色譜條件還包括：柱溫為25℃；流動相為質量分數為0.2％的甲酸銨/甲醇溶液；流速為0.5mL/min；運行總時間為40min；進樣體積為10μL。