[發明專利]一種血漿中煙堿及其主要代謝物的手性分析方法

有效

• 申請號: 202010914265.8
• 申請日: 2020-09-03
• 公開（公告）號: CN111983110B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 韓書磊;金光祥;陳歡;王紅娟;付亞寧;郭溪香;劉彤;侯宏衛;胡清源
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 侯淑紅

1.一種血漿中煙堿及其主要代謝物的手性分析方法，該方法包括如下步驟：

（1）精密吸取50~200μL待測血漿樣本于1.5 mL離心管中，加入4~10倍體積內標萃取溶液以沉淀蛋白，渦旋振蕩1~3 min后，于2~5℃條件下以10000~15000 rpm的速度離心5~10min，取上清液備用；

（2）取步驟（1）的上清液進行高效液相色譜-串聯質譜（HPLC-MS/MS）分析，分析條件如下：

色譜條件：色譜柱為長度×內徑×粒徑為250×4.6mm×3μm 的Chiralpak IG-3色譜柱并加長度×內徑×粒徑為10 mm×4.0 mm×3μm的保護柱，柱溫為25℃；流動相為質量分數為0.2%的甲酸銨/甲醇溶液，流速為0.5 mL/min，運行總時長為40 min；進樣體積10 μL；

質譜條件：離子源：電噴霧離子源；離子化方式：ESI+；檢測模式：MRM模式；離子源溫度（TEM）：500 ℃；電噴霧電壓（IS）：5500 V；氣簾氣（CUR）：2.4×10⁵ Pa；碰撞氣（CAD）：4.1×10⁴ Pa；離子源氣流GS1：3.4×10⁵ Pa；離子源氣流GS2：4.1×10⁵ Pa；入口電壓（EP）：10 V；射出電壓（CXP）：10 V；目標化合物和內標的MRM質譜檢測參數如下：

（3）采用內標標準曲線法定量計算樣品中目標物的含量，其中所述內標標準曲線法為：配制含有目標物的系列標準工作溶液，加入內標煙堿-d3、可替寧-d3、可替寧氮氧化物-d3和降可替寧-d4，以各標準工作溶液中目標物與其內標的定量離子峰面積比為縱坐標，以各標準工作溶液中目標物的含量為橫坐標制作標準工作曲線；將步驟（2）的分析結果代入標準曲線中，得到待測溶液中的目標物含量，再進一步計算得到樣品中各目標物的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（1）中，所述內標萃取溶液為各內標的甲醇溶液。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（1）中，所述內標萃取溶液濃度為20~50 ng/mL。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，在步驟（3）中，所述系列標準工作溶液中各目標物的濃度范圍為0.5~250 ng/mL，定量下限均為0.5 ng/mL。

5.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述血漿為人體或動物血漿。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述動物血漿為大鼠或小鼠血漿。