[發(fā)明專利]一種針對高血壓的藥物靶點表達和純化方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010911659.8 | 申請日： | 2020-09-02 |
| 公開（公告）號： | CN111961687A | 公開（公告）日： | 2020-11-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張進;李健;萬雙燕 | 申請（專利權(quán)）人： | 深圳晶蛋生物醫(yī)藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/866 | 分類號： | C12N15/866;C12N15/12;C12P21/02 |
| 代理公司： | 新余市渝星知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 36124 | 代理人： | 廖平 |
| 地址： | 518118 廣東省深圳市坪山區(qū)坪山*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 針對 高血壓 藥物 表達 純化 方法 | ||
1.一種針對高血壓的藥物靶點表達和純化方法，其特征在于，包括如下步驟：將人全長TRPM4基因片段克隆到pAntigen Mem載體，篩選陽性克隆；提取質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH10菌株，挑選陽性克隆；抽提桿粒，在桿狀病毒表達系統(tǒng)中產(chǎn)生P3桿狀病毒；將P3桿狀病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)入HEK293S GnTI-細胞，誘導(dǎo)表達，收集純化藥物靶點。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針對高血壓的藥物靶點表達和純化方法，其特征在于，所述人全長TRPM4基因片段編碼第1-1214號氨基酸序列，其氨基酸序列如sequence No.1所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針對高血壓的藥物靶點表達和純化方法，其特征在于，轉(zhuǎn)導(dǎo)時，HEK293S GnTI-細胞密度為2.0-3.0×106細胞/ml，P3桿狀病毒加入體積為細胞液的1/10。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針對高血壓的藥物靶點表達和純化方法，其特征在于，細胞培養(yǎng)使用帶擋板的燒瓶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針對高血壓的藥物靶點表達和純化方法，其特征在于，轉(zhuǎn)導(dǎo)12-24h后，向細胞液中加入丁酸鈉至終濃度為10mM。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針對高血壓的藥物靶點表達和純化方法，其特征在于，轉(zhuǎn)導(dǎo)12-24h后，細胞培養(yǎng)溫度降至30℃。
7.人全長TRPM4基因片段編碼的Sequence No.1的蛋白作為高血壓的藥物靶點的應(yīng)用。
8.一種以人全長TRPM4基因片段編碼的Sequence No.1的開發(fā)的治療高血壓的藥物。
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