[發明專利]基于ddPCR自動化檢測HIV-1的引物組、探針組、試劑盒及用途

在審

• 申請號: 202010909795.3
• 申請日: 2020-09-02
• 公開（公告）號: CN111961760A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 胥萍;徐俊馳;程軍平;吳敏娟;宋華峰;陳慧;宋翌琰;張惠丹;戴敬
• 申請（專利權）人: 蘇州市第五人民醫院;蘇州德思普生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王茹

本發明公開了一種基于ddPCR自動化檢測HIV?1的引物組、探針組、試劑盒及用途。本發明中基于ddPCR定量檢測HIV?1的引物組、探針組包含的各引物、探針序列分別如SEQ ID NO.1～9所示。本發明還提供了一種基于ddPCR自動化檢測HIV?1的試劑盒；配套的8連管可直接置于自動化檢測儀器的試劑卡槽中，操作簡便。本發明提供的引物組特異性高，實現高效反轉錄、擴增反應，并能覆蓋HIV?1的多個亞型；同時本發明提供的包含試劑盒的產品操作簡便，自動化操作，靈敏度高，抑制物耐受度高，而且本發明供了一種自動化、快速、高精度HIV?1定量檢測方法。

技術領域

本發明屬于核酸檢測技術領域，具體涉及一種基于ddPCR自動化檢測HIV-1的引物組、探針組、試劑盒及用途。

背景技術

人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)一種RNA病毒，屬于慢病毒屬。參考《中國艾滋病診療指南(2018版)》，截至2017年底，全球現存活HIV/AIDS患者3690 萬例。通過侵犯、破壞CD4+T淋巴細胞，導致機體免疫細胞和功能受損，并發各種嚴重的機會感染和腫瘤，是一種傳播迅速、發病緩慢、死亡率高的傳染性疾病。HIV在感染后6-8年處于無癥狀期。在此期間無明顯臨床表現，但病毒在患者體內復制并持續破壞患者的免疫系統，直到出現明顯的病發癥狀。病毒載量測定的臨床意義為預測疾病進程、評估治療效果、指導治療方案調整。

HIV/AIDS的實驗室檢測主要包括HIV抗體檢測、HIV核酸定性和定量檢測、CD4+T淋巴細胞計數。HIV-1/2抗體檢測是HIV感染診斷的金標準，HIV核酸檢測(定性和定量)也用于HIV感染診斷；HIV核酸定量(病毒載量)和CD4+T淋巴細胞計數是判斷疾病進展、臨床用藥、療效和預后的兩項重要指標；相較與抗原抗體檢測，核酸檢測對于急性期/窗口期診斷、晚期患者診斷、HIV感染診斷和小于18月齡的嬰幼兒HIV感染診斷有顯著優勢。目前，核酸檢測技術已經在各實驗室普及，還可以通過將病毒核酸擴增提高檢測的靈敏度，縮短病毒檢測的窗口期。

HIV核酸檢測過程中需要高級別的防護，實現全自動化對更安全的檢測環境具有重大意義，還可以節省人力，避免操作過程中可能出現的樣本錯誤。快檢體系可以縮短檢測時間，對臨床檢測意義重大。因此，實現HIV的自動化、快速、高精度定量檢測是HIV的臨床快檢急需的。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種基于ddPCR自動化檢測HIV-1的引物組、探針組、試劑盒及用途，以克服現有技術的不足。

HIV核酸檢測常用的方法有qPCR、數字PCR；qPCR技術有良好的特異性，平臺建設普及，檢測下限不及數字PCR；數字PCR具有更高的靈敏度和更低的檢測下限，特別是搭配自動化數字PCR工作站，可以實現自動化、更高精度的檢測。

為實現前述發明目的，本發明采用的技術方案包括：

本發明實施例提供了一種基于ddPCR自動化檢測HIV-1的引物組，其包括：

第一引物，其序列如SEQ ID NO.1所示；

第二引物，其序列如SEQ ID NO.2所示；

第三引物，其序列如SEQ ID NO.3所示；

第四引物，其序列如SEQ ID NO.4所示；

第五引物，其序列如SEQ ID NO.5所示；

第六引物，其序列如SEQ ID NO.6所示。

本發明實施例提供了一種基于ddPCR自動化檢測HIV-1的探針組，其包括：

第一探針，其序列如SEQ ID NO.7所示；

第二探針，其序列如SEQ ID NO.8所示；