[發明專利]基于ddPCR自動化檢測HIV-1的引物組、探針組、試劑盒及用途

在審

• 申請號: 202010909795.3
• 申請日: 2020-09-02
• 公開（公告）號: CN111961760A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 胥萍;徐俊馳;程軍平;吳敏娟;宋華峰;陳慧;宋翌琰;張惠丹;戴敬
• 申請（專利權）人: 蘇州市第五人民醫院;蘇州德思普生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王茹

1.一種基于ddPCR自動化檢測HIV-1的引物組，其特征在于包括：

第一引物，其序列如SEQ ID NO.1所示；

第二引物，其序列如SEQ ID NO.2所示；

第三引物，其序列如SEQ ID NO.3所示；

第四引物，其序列如SEQ ID NO.4所示；

第五引物，其序列如SEQ ID NO.5所示；

第六引物，其序列如SEQ ID NO.6所示。

2.根據權利要求1所述的基于ddPCR自動化檢測HIV-1的引物組，其特征在于：所述引物組中第一引物、第二引物、第三引物、第四引物、第五引物、第六引物的摩爾比為0.7-0.9:0.7-0.9:1.1-1.3:1.1-1.3:0.9-1.0:0.9-1.0，優選為0.8:0.8:1.2:1.2:1.0:1.0。

3.一種基于ddPCR自動化檢測HIV-1的探針組，其特征在于包括：

第一探針，其序列如SEQ ID NO.7所示；

第二探針，其序列如SEQ ID NO.8所示；

第三探針，其序列如SEQ ID NO.9所示。

4.根據權利要求3所述的基于ddPCR自動化檢測HIV-1的探針組，其特征在于：所述探針組中第一探針、第二探針、第三探針的摩爾比為0.35-0.45:0.5-0.7:0.4-0.6，優選為0.4:0.6:0.5。

5.一種基于ddPCR自動化檢測HIV-1的引物組和探針組的組合物，其特征在于至少包括權利要求1所述的引物組和權利要求3所述的探針組。

6.一種基于ddPCR自動化檢測HIV-1的試劑盒，其特征在于至少包括權利要求1所述的引物組和權利要求3所述的探針組。

7.根據權利要求6所述的基于ddPCR自動化檢測HIV-1的試劑盒，其特征在于還包括PCR擴增檢測的常規組件；優選的，所述PCR擴增檢測的常規組件包括熱啟動快速Taq酶緩沖液、三磷酸堿基脫氧核苷酸混合液、熱啟動快速Taq酶、RNA逆轉錄酶。

8.根據權利要求6所述的基于ddPCR自動化檢測HIV-1的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括熒光標記基因FAM、CY5、VIC；

和/或，所述試劑盒還包括陰性質控品和陽性質控品；優選的，所述陰性質控品包括包裹含ALD RNA待檢序列的假病毒和保存液；優選的，所述陰性質控品中裹含ALD RNA待檢序列的假病毒的濃度滴度為10²/100μL；優選的，所述陽性質控品包括包裹含ALD RNA待檢序列、HIV待檢序列的假病毒和保存液；優選的，所述陽性質控品中包裹含ALD RNA待檢序列、HIV-1待檢序列的假病毒的濃度滴度為10²/100μL；優選的，所述ALD RNA目標序列如SEQ IDNO.10所示。

9.權利要求6-8中任一項所述試劑盒于制備基于ddPCR自動化檢測HIV-1的產品中的用途。

10.一種產品，其特征在于包含權利要求6-8中任一項所述試劑盒，所述產品應用于基于ddPCR自動化檢測HIV-1的方法，并且所述方法包括：

提供待檢測樣本；

將所述待檢測樣本與所述試劑盒中的PCR擴增檢測的常規組件混合形成混合液；

將所述混合液形成微液滴，之后采用數字PCR檢測技術，對所述微液滴進行PCR擴增；

以及，對PCR擴增產物進行定量檢測分析；

優選的，所述產品包括配套有8連管自動化檢測儀器；優選的，所述試劑盒分裝于8連管中。