[發明專利]一種含rhBMP-2帶骨膜自體顱骨瓣的保存方法

有效

• 申請號: 202010909789.8
• 申請日: 2020-09-02
• 公開（公告）號: CN112042636B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 林衛軍;江柏齡
• 申請（專利權）人: 江西省元化低溫醫學科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 蘇州中合知識產權代理事務所(普通合伙) 32266
• 代理人: 劉召民

1.一種含rhBMP-2帶骨膜自體顱骨瓣的保存方法，包括以下步驟：

1)將手術中取下的帶骨膜顱骨瓣置入保存液C中，冷鏈運輸至十萬級的無菌操作間或超潔凈無菌操作臺，所述帶骨膜顱骨瓣包括手術中咬下的顱骨碎塊，所述保存液C為含有抗生素的甘油溶液或代血漿膠體溶液；

2)在無菌操作環境下，用等滲鹽水清洗血跡，并剔除除骨膜之外的軟組織，清理干凈后用2％碘伏溶液浸泡30分鐘，再用75％酒精清洗脫碘，最后再用等滲鹽水沖洗干凈并用無菌紗布擦干；

3)在無菌操作環境下，在顱骨內板上磨孔，到達顱骨外板停止，不穿破外板；

4)磨鉆下來的顱骨碎與重組人骨形態發生蛋白質-2及載體材料混合，回填至骨孔并等待固化；

5)固化完成后各鉆孔處外口用骨臘涂抹封堵，操作完成后的骨瓣在無菌操作環境下用紫外線照射；

6)將照射完成后的骨瓣置入無菌保存盒A中，同時取一小塊顱骨置入另一無菌保存盒B中，均倒入保存液D浸沒并密封，所述保存液D為添加有抗生素和細胞防凍液的培養基溶液；

7)將保存盒A內的骨瓣先冷卻到0℃，轉入-20℃冷箱冷凍6～8小時，再轉入-40℃冰箱冷凍24～48小時后沉入液氮中保存，對保存盒B內的小顱骨塊及保存液進行細菌培養檢查，并對小顱骨塊進行骨細胞形態檢測，若檢測為無菌且骨細胞形態符合使用要求，則表示保存盒A內的骨瓣也為無菌且骨細胞形態符合使用要求，可用于植入。

2.根據權利要求1所述的一種含rhBMP-2帶骨膜自體顱骨瓣的保存方法，其特征在于，步驟1)中，將手術中取下的帶骨膜顱骨瓣置入盛有保存液C的保存盒中進行冷鏈運輸。

3.根據權利要求1所述的一種含rhBMP-2帶骨膜自體顱骨瓣的保存方法，其特征在于，所述保存液C中含有的抗生素包括慶大霉素，左氧氟沙星，萬古霉素，青霉素和鏈霉素。

4.根據權利要求1-3任意一項所述的一種含rhBMP-2帶骨膜自體顱骨瓣的保存方法，其特征在于，所述甘油溶液中含有重量百分比為10％～75％的甘油，包括甘油果糖和甘油果糖氯化鈉；所述代血漿膠體溶液包括右旋糖苷和羥乙基淀粉。

5.根據權利要求1所述的一種含rhBMP-2帶骨膜自體顱骨瓣的保存方法，其特征在于，步驟3)中，磨孔的直徑4mm～6mm，間隔4cm～6cm。

6.根據權利要求1所述的一種含rhBMP-2帶骨膜自體顱骨瓣的保存方法，其特征在于，步驟4)中，每mg顱骨碎與0.3mg～0.5mg重組人骨形態發生蛋白質-2，1mg載體材料混合。

7.根據權利要求1或6所述的一種含rhBMP-2帶骨膜自體顱骨瓣的保存方法，其特征在于，所述載體材料由重量比為1：1：1的羥基磷灰石、卵磷脂及藥用明膠組成。

8.根據權利要求1所述的一種含rhBMP-2帶骨膜自體顱骨瓣的保存方法，其特征在于，步驟5)中，照射劑量為100000～500000uW.s/CM²。

9.根據權利要求1所述的一種含rhBMP-2帶骨膜自體顱骨瓣的保存方法，其特征在于，所述保存液D中添加的抗生素包括慶大霉素，左氧氟沙星，萬古霉素，青霉素和鏈霉素。

10.根據權利要求1或9所述的一種含rhBMP-2帶骨膜自體顱骨瓣的保存方法，其特征在于，所述保存液D包括含10％～20％二甲基亞砜的M199培養基溶液，含10％～20％甘油的DMEM培養基溶液。