[發(fā)明專利]一種生發(fā)片HPLC指紋圖譜的構建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010908775.4
• 申請日: 2020-09-02
• 公開（公告）號: CN112213414B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發(fā)明（設計）人: 姚宏亮;劉穎;彭維;周雪蕓;王永剛;李碩俊;蘇薇薇;黃麗巧
• 申請（專利權）人: 廣西南寧百會藥業(yè)集團有限公司;中山大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南寧啟創(chuàng)知識產(chǎn)權代理事務所(特殊普通合伙) 45122
• 代理人: 謝美萱

本發(fā)明公開一種生發(fā)片HPLC指紋圖譜的構建方法，屬于中藥分析技術領域，針對以中藥何首烏、女貞子、墨旱蓮、地黃、山藥、茯苓、牡丹皮、澤瀉、桑椹、麥冬、黑棗、黑豆為原料制成的生發(fā)片中藥片劑為檢測目標，采用高效液相色譜法得到生發(fā)片高效液相色譜指紋圖譜。本發(fā)明所構建的指紋圖譜10個共有特征峰，利用DAD檢測器和UFLC?TRIPLETOF?DAD?MS/MS技術手段確證和指認了10個化學成分。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法能夠全面、系統(tǒng)的檢測處方中的藥材，對制劑生產(chǎn)工藝全過程的質(zhì)量控制和最終產(chǎn)品的質(zhì)量評價，具有實際的應用價值。

技術領域

本發(fā)明屬于中藥分析技術領域，具體涉及一種以中藥原料制成的生發(fā)片HPLC指紋圖譜的構建方法。

背景技術

本發(fā)明所用的生發(fā)片是以中藥何首烏、女貞子、墨旱蓮、地黃、山藥、茯苓、牡丹皮、澤瀉、桑椹、麥冬、黑棗、黑豆為原料制成的中藥片劑，具有滋補肝腎，益氣養(yǎng)血，生發(fā)烏發(fā)功能。用于肝腎不足、氣血虧虛所致的頭發(fā)早白、脫落；斑禿，全禿，脂溢性脫發(fā)，具有廣闊的臨床應用前景。本發(fā)明提供一種生發(fā)片HPLC指紋圖譜的構建方法，通過生發(fā)片標準指紋圖譜，能對其質(zhì)量進行監(jiān)控，確保成品的均一性。

現(xiàn)有技術中對中藥制劑的HPLC指紋圖譜的構建方法中，多采用測定某一顯著成分的含量，而中藥制劑的藥效往往是多種活性成分共同作用的結(jié)果，因此，某一成分的含量合格不能代表整體的質(zhì)量水平，具有很大的局限性。公告號為CN103926351B的中國發(fā)明專利公開了一種生血寶制劑質(zhì)量檢測方法及其標準指紋圖譜的構建方法，對由制何首烏、女貞子、桑葚、墨旱蓮、白芍、黃芪、狗脊組成的生血寶進行質(zhì)量檢測，以芍藥苷為對照品，分別指認了7個特征峰，以實現(xiàn)檢測組方中7種藥物的含量的目的，其中，得到了制何首烏、女貞子、白芍、黃芪的專屬特征峰，其余3種藥物對應為共有峰，且構建圖譜方法復雜，不適合多組方的中藥制劑。

因此，現(xiàn)需研究以中藥何首烏、女貞子、墨旱蓮、地黃、山藥、茯苓、牡丹皮、澤瀉、桑椹、麥冬、黑棗、黑豆為原料生發(fā)片的標準指紋圖譜的構建。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種生發(fā)片HPLC指紋圖譜的構建方法，是以生發(fā)片中藥片劑為檢測目標，采用高效液相色譜法得到生發(fā)片高效液相色譜指紋圖譜，構建圖譜方法簡單，所得指紋圖譜各特征峰分離效果好，檢測準確度高。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

一種生發(fā)片HPLC指紋圖譜的構建方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取生發(fā)片除去包衣后研細，得到供試品粉末，將供試品粉末按料液比為0.5g：9-10mL加入溶劑，超聲處理28-30分鐘，放冷后用溶劑補足減失的重量，搖勻，過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液，即得；

(2)對照品溶液的制備：分別稱取二苯乙烯苷、大豆苷、特女貞苷、芍藥苷為對照品并混合，再加入溶劑制成每mL含上述各對照品50-55μg的對照品溶液；

(3)采用高效液相色譜法分析上述供試品溶液和對照品溶液，得到生發(fā)片高效液相色譜指紋圖譜；再利用DAD檢測器和UFLC-TRIPLE TOF-DAD-MS/MS技術手段對主要峰進行色譜峰歸屬及峰純度檢測；質(zhì)譜工作參數(shù)：ESI電噴霧離子源，離子噴霧電壓負模式-4500V；噴霧氣55psi；輔助加熱氣55psi；離子源溫度550℃；氣簾氣35psi；碰撞氣壓力10psi,掃描范圍m/z100-2000，采用負離子模式進行檢測；通過DAD光譜比較，結(jié)合質(zhì)譜的分子離子峰、裂解碎片信息鑒定。

進一步地，所述生發(fā)片是以中藥何首烏、女貞子、墨旱蓮、地黃、山藥、茯苓、牡丹皮、澤瀉、桑椹、麥冬、黑棗、黑豆為原料制成。

進一步地，所述溶劑為70-100％的甲醇或乙醇。

進一步地，在步驟(1)中，所述超聲處理是在功率250-300W、頻率35-40kHz的條件下進行。