[發明專利]一種生發片HPLC指紋圖譜的構建方法

有效

• 申請號: 202010908775.4
• 申請日: 2020-09-02
• 公開（公告）號: CN112213414B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 姚宏亮;劉穎;彭維;周雪蕓;王永剛;李碩俊;蘇薇薇;黃麗巧
• 申請（專利權）人: 廣西南寧百會藥業集團有限公司;中山大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南寧啟創知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 45122
• 代理人: 謝美萱

1.一種生發片HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）供試品溶液的制備：取生發片除去包衣后研細，得到供試品粉末，將供試品粉末按料液比為0.5g：加入9-10mL溶劑，超聲處理28-30分鐘，放冷后用溶劑補足減失的重量，搖勻，過0.45μm濾膜，取續濾液，即得；

所述生發片是以中藥何首烏、女貞子、墨旱蓮、地黃、山藥、茯苓、牡丹皮、澤瀉、桑椹、麥冬、黑棗、黑豆為原料制成；

（2）對照品溶液的制備：分別稱取二苯乙烯苷、大豆苷、特女貞苷、芍藥苷為對照品并混合，再加入溶劑制成每mL含上述各對照品50-55μg的對照品溶液；

（3）采用高效液相色譜法分析上述供試品溶液和對照品溶液，得到生發片高效液相色譜指紋圖譜；所述色譜柱為規格為4.6×250mm、5μm的 C₁₈鍵合硅膠柱，所述色譜條件為：進樣量10μL；以甲醇為流動相A，0.1%磷酸溶液或0.1%甲酸溶液為流動相B，進行梯度洗脫，0min→105min，5%→60%A，95%→40%B，柱溫25℃，檢測波長225~229nm；

再利用DAD檢測器和UFLC-TRIPLE TOF-DAD-MS/MS技術手段對主要峰進行色譜峰歸屬及峰純度檢測；質譜工作參數：ESI電噴霧離子源，離子噴霧電壓負模式-4500V；噴霧氣55psi；輔助加熱氣55psi；離子源溫度550℃；氣簾氣35psi；碰撞氣壓力10psi，掃描范圍m/z100-2000，采用負離子模式進行檢測；通過DAD光譜比較，結合質譜的分子離子峰、裂解碎片信息鑒定；

所述溶劑為70-100%的甲醇或乙醇。

2.根據權利要求1所述生發片HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，在步驟（1）中，所述超聲處理是在功率250-300W、頻率35-40kHz的條件下進行。

3.根據權利要求1所述生發片HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，在步驟（3）中，所述指紋圖譜檢測出10個共有色譜峰，1號峰為沒食子酸、2號峰為原兒茶酸、3號峰為芍藥苷、4號峰為大豆苷、5號峰為Suffruticoside C或異構體、6號峰為二苯乙烯苷、7號峰為染料木苷、8號峰為特女貞苷、9號峰女貞苷G13或異構體、10號峰為苯甲酰芍藥苷。

4.根據權利要求1所述生發片HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，在步驟（3）中，所述指紋圖譜檢測出10個共有色譜峰，歸屬于何首烏的特征峰為1、6號峰；歸屬于女貞子的特征峰為2、8、9號峰；歸屬于黑豆的特征峰為2、4、7號峰；歸屬于墨旱蓮的特征峰為2號峰；歸屬于牡丹皮的特征峰為1、3、5、10號峰。