[發(fā)明專利]產(chǎn)己酸乙酯的葡萄牙棒孢酵母菌株及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010908289.2
• 申請日: 2020-09-02
• 公開（公告）號: CN111909861B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李秀婷;范光森;孫寶國;滕超;富志磊;劉朋肖
• 申請（專利權(quán)）人: 北京工商大學(xué)
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P7/62;C12G3/02;C12R1/645
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 凃滔

本發(fā)明涉及生物合成己酸乙酯的葡萄牙棒孢酵母菌株及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用，該菌株命名為Clavispora lusitaniae YX3308，已于2020年4月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及新分離的產(chǎn)己酸乙酯的酵母菌株及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用。

技術(shù)背景

白酒是中國的國酒，中國白酒獨特的發(fā)酵工藝以及開放的釀造環(huán)境，使得中國白酒風(fēng)味成分的多樣性和獨特性高于其他五大蒸餾酒。白酒中的香氣成分十分復(fù)雜，主要分為酯類、酸類、高級醇、醛類等，白酒中酯類和高級醇是評價白酒質(zhì)量的重要指標(biāo)。酯類是白酒風(fēng)味化合物中種類最多的一類化合物，在白酒中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的酯類超過400余種，含量占微量成分總量的75-95％，是白酒中含量較多的有機化合物。酯類物質(zhì)能夠散發(fā)出濃郁的果香，可以增強且豐富酒香的效果，在不同香型的白酒中，酯類物質(zhì)是決定其特色的重要因素之一。己酸乙酯是濃香型白酒的主體香型，在感官上具有水果香的揮發(fā)性酯類，在濃香型白酒風(fēng)味起著重要的作用。在國標(biāo)中顯示，一級濃香型白酒中己酸乙酯含量為0.6-2.5g/L，優(yōu)級濃香型白酒中己酸乙酯含量為1.2-2.8g/L。以上均體現(xiàn)了己酸乙酯在白酒中的地位。

白酒中的己酸乙酯主要是體系中的己酸和乙醇經(jīng)過酯化生成，在發(fā)酵過程中產(chǎn)生，大曲作為白酒發(fā)酵動力，為發(fā)酵提供了豐富的菌源，酵母菌是一類具有產(chǎn)己酸乙酯能力的微生物屬，是傳統(tǒng)發(fā)酵食品中酯類物質(zhì)主要產(chǎn)生菌株。根據(jù)國內(nèi)外研究，在酵母菌株中研究較少，且產(chǎn)量低。在采用生物技術(shù)產(chǎn)己酸乙酯的過程中，需要解決的關(guān)鍵問題是如何從源頭上提高己酸乙酯的能力，也就是說，尋找高產(chǎn)己酸乙酯的酵母菌株是解決這一問題的關(guān)鍵。

隨著白酒現(xiàn)代化分析研究發(fā)現(xiàn)，己酸乙酯是我國濃香型白酒中的特色風(fēng)味物質(zhì)，對于白酒的風(fēng)味具有重要的影響。獲得能高產(chǎn)己酸乙酯的酵母菌株，并將其強化應(yīng)用到白酒釀造體系中，對于提高白酒己酸乙酯含量，提升白酒品質(zhì)具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對酵母產(chǎn)己酸乙酯種類少、產(chǎn)量低等問題，以及提高傳統(tǒng)釀造食品白酒中己酸乙酯含量，提升白酒品質(zhì)的實際應(yīng)用，本發(fā)明目的在于提供從白酒酒曲中新分離的高產(chǎn)己酸乙酯的菌株，命名為YX3308，并提供使用YX3308產(chǎn)己酸乙酯的培養(yǎng)方法與應(yīng)用。

本發(fā)明涉及的酵母是通過梯度稀釋法結(jié)合平板涂布法從釀酒酒曲中篩選獲得，為葡萄牙棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)，該菌株已于申請日前保藏于位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC 19730。

在一些實施方案中，上述所述菌株YX3308具有以下菌落特征和生化特征：

該菌株在固體培養(yǎng)基WL培養(yǎng)基上菌落呈乳白色，邊緣規(guī)則，中間微微突起，濕潤易挑起，細胞為橢圓形、芽殖；

該酵母菌株對葡萄糖的最高耐受為80％(w/v)、對氯化鈉的最高耐受為15％；

該酵母菌株能夠耐受0.06％己酸；能夠耐受6％乙醇；能夠耐受1200mg/L己酸乙酯，表明該菌株具有高產(chǎn)己酸乙酯的潛力；

該酵母菌株具有廣泛的pH和溫度適應(yīng)性；

該酵母菌株在葡萄糖產(chǎn)酸、淀粉水解實驗、脂肪酶水解實驗、重氮藍B實驗、新生隱球菌實驗、TTC實驗、耐受1％乙酸實驗、尿素水解實驗均呈現(xiàn)陰性；

該酵母菌株在L-DOPA黑色素實驗和熊果苷分解實驗呈陽性；

該酵母菌株可耐受25ug/mL的放線菌銅。

葡萄牙棒孢酵母YX3308可以用于發(fā)酵過程中產(chǎn)己酸乙酯，在優(yōu)化的培養(yǎng)條件下產(chǎn)量可達62.04mg/L。可以作為提高白酒中己酸乙酯含量的功能微生物菌株應(yīng)用到白酒的生產(chǎn)中。