[發明專利]外泌體在制備治療肺纖維化的藥物中的應用

有效

• 申請號: 202010903534.0
• 申請日: 2020-09-01
• 公開（公告）號: CN112121063B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 顧雨春
• 申請（專利權）人: 北京諾德觀呈醫療科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28;A61K35/545;A61P11/00;C12N5/10;C12N5/0735
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 姚曉麗

1.外泌體在制備治療肺纖維化的藥物中的應用，所述外泌體為iPS細胞的外泌體、MSC細胞的外泌體和EPC細胞的外泌體按質量比為1：1：1或1：2：1的混合物。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述外泌體的劑量為20μg/kg體重。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述iPS細胞的外泌體的制備方法是：取iPS細胞，置于含5%體積的O₂和5%體積的CO₂、溫度為37℃的培養箱中，分別在24h和48h換液，收集上清液，分離，得到iPS細胞的外泌體；所述MSC細胞的外泌體的制備方法是：取MSC細胞，置于含5%體積的O₂和5%體積的CO₂、溫度為37℃的培養箱中，分別在24h和48h換液，收集上清液，分離，得到MSC細胞的外泌體；所述EPC細胞的外泌體的制備方法是：取EPC細胞，置于含5%體積的O₂和5%體積的CO₂、溫度為37℃的培養箱中，分別在24h和48h換液，收集上清液，分離，得到EPC細胞的外泌體。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述iPS細胞的培養方法是：（1）采集外周血單核細胞，經培養擴增穩定后，進行質粒電轉，將重編程組合質粒一同轉入成纖維細胞或外周血單核細胞中，隨后接種到培養板中，置于37℃、5%CO₂培養箱內培養；（2）按照外周血單核細胞重編程培養流程進行培養操作，定期更換重編程完全培養基，至iPS形成較大克隆開始挑取單克隆，轉移至24孔板中逐代擴增，即得到iPS細胞。

5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述MSC細胞的培養方法是：取健康新生兒的新鮮臍帶，用PBS將臍帶沖洗干凈，剔去血管，剝出華氏膠組織，將剩余組織充分剪碎至1mm³大小，加入α-MEM培養液，于37℃、5% CO₂培養箱中培養，待細胞長滿后，用質量百分數為0.25%的胰蛋白酶消化傳代；加PBS調整細胞濃度至1×10⁶/mL，即得到MSC細胞。

6.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述EPC細胞的制備方法是：（1）取iPS，接種于基底膜基質預處理后的細胞培養板中，置于37℃、5%CO₂培養箱中，靜置過夜；（2）iPS鋪種一天后，更換中胚層誘導培養基，置于37℃、5%CO₂細胞培養箱中孵育，維持3天不換液直至側板中胚層細胞形成；（3）更換EPC細胞誘導培養基，將細胞培養板放回37℃、5%CO₂培養箱中，孵育24h后重復換液操作，再將細胞培養板放回37℃、5%CO₂培養箱中，再孵育24h，即得到EPC細胞。

7.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述藥物包括外泌體和藥物可接受的載體或賦形劑。

8.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述藥物的劑型為外用制劑或者口服制劑。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述外用制劑為噴霧劑或氣霧劑；所述口服制劑為顆粒劑、膠囊劑、片劑和囊泡劑中的任意一種。