[發明專利]一種實現熒光共振轉移的結構及其應用

有效

• 申請號: 202010902709.6
• 申請日: 2020-09-01
• 公開（公告）號: CN111999277B
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發明（設計）人: 孫俊良
• 申請（專利權）人: 北京蘇瑞同創科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/543;G01N33/552;G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 北京壹川鳴知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11765
• 代理人: 徐軍科

1.一種實現熒光共振轉移的結構，其特征在于，所述結構具體包括光敏化載體和熒光微球；或者所述結構具體包括熒光化載體和光敏微球；

所述光敏化載體的制備方法包括以下步驟：

將淀粉、異氰酸酯、丁二酸溶于水中，得到溶液A；接著，加入羅丹明B溶解搖勻，得到溶液B；然后，取溶液B旋涂于表面經NaOH處理洗凈的玻璃片的表面后，再用紫外線照射，并用去離子水清洗，得到羧基化的光敏化載體；

所述熒光微球的制備方法包括以下步驟：

往含有羧基化聚苯乙烯微球的水溶液C中加入異氰酸酯、聚環氧乙烷、4,5-二甲硫基-4’-[2-(9-蒽氧基)乙硫基]四硫富瓦烯，并定容；接著，用紫外線照射并劇烈攪拌，然后經離心超聲清洗除去未鍵連小分子，得到熒光微球；

所述熒光化載體的制備方法包括以下步驟：

將異氰酸酯和己二酸溶于水中，得到溶液A；接著，加入酞菁衍生物溶解搖勻，得到溶液B；然后，取溶液B旋涂于表面經NaOH處理洗凈的鋁片的表面后，再用紫外線照射，并用去離子水清洗，得到熒光化載體；

所述光敏微球的制備方法包括以下步驟：

往含有羧基化聚苯乙烯微球的水溶液C中加入異氰酸酯、血卟啉鎂、二甲基甲酰胺，并用水定容；接著，用紫外線照射并劇烈攪拌，然后經離心超聲清洗除去未鍵連小分子和有機溶劑，得到光敏微球。

2.一種如權利要求1所述的結構在熒光共振轉移中的應用，其特征在于，所述應用包括以下步驟：

（1）燒杯中加入上述光敏化載體，以及加入標記緩沖液，震蕩混勻；

（2）加入活化緩沖液，室溫振蕩反應；

（3）加入C反應蛋白的抗體1，室溫振蕩反應；

（4）加入封閉緩沖液，室溫混勻；

（5）加入封閉緩沖液，37℃振蕩反應；

（6）棄去溶液，得到標記好的光敏化載體，室溫下晾干后保存待用；

（7）取上述熒光微球，加入標記緩沖液，超聲混勻；

（8）加入活化緩沖液，室溫振蕩反應；

（9）加入C反應蛋白的抗體2，超聲混勻，37℃振蕩反應；

（10）加入封閉緩沖液，37℃混勻；

（11）加入封閉緩沖液，37℃振蕩反應；

（12）低溫離心機離心，棄去上清液，使用重懸緩沖液重懸并超聲分散，直至混勻，得到標記好的熒光微球；

（13）把上述標記好的光敏化載體作為捕捉位點，將血清樣本與上述標記好的熒光微球混合后，再滴加到上述標記好的光敏化載體上，并置于室溫孵育，使反應充分進行；然后，放置到熒光檢測設備中，經532nm激發，通過4,5-二甲硫基-4’-[2-(9-蒽氧基)乙硫基]四硫富瓦烯的420nm熒光發射強度得到待測抗原的濃度；

或者，所述應用包括以下步驟：

（1）燒杯中加入上述熒光化載體，以及加入標記緩沖液，震蕩混勻；

（2）加入活化緩沖液，室溫振蕩反應；

（3）加入降鈣素原的抗體1，室溫振蕩反應；

（4）加入封閉緩沖液，室溫混勻；

（5）加入封閉緩沖液，37℃振蕩反應；

（6）棄去溶液，得到標記好的熒光化載體，室溫下晾干后保存待用；

（7）取上述光敏微球，加入標記緩沖液，超聲混勻；

（8）加入活化緩沖液，室溫振蕩反應；

（9）加入降鈣素原的抗體2，超聲混勻，37℃振蕩反應；

（10）加入封閉緩沖液，37℃混勻；

（11）加入封閉緩沖液，37℃振蕩反應；

（12）低溫離心機離心，棄去上清液，使用重懸緩沖液重懸并超聲分散，直至混勻，得到標記好的光敏微球；

（13）將血清樣本與上述標記好的光敏微球混合后，再滴加到上述標記好的熒光化載體上，并置于37℃孵育3分鐘，使反應充分進行；然后，放置到熒光檢測設備中，經420nm照射，通過酞菁衍生物的700nm熒光發射強度得到待測抗原的濃度。