[發(fā)明專利]用于人甲狀腺癌基因融合試劑盒及檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010902632.2
• 申請(qǐng)日: 2020-09-01
• 公開（公告）號(hào): CN112011615A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王寶霞;胡春旭;高伙妮;何文天;包文靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海睿璟生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886;C12Q1/686
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種甲狀腺癌基因融合檢測(cè)點(diǎn)，其特征在于：所述甲狀腺癌基因融合檢測(cè)點(diǎn)如表1融合基因及融合類型所示。

2.一種用于人甲狀腺癌基因融合試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括RNA提取試劑盒、RNA逆轉(zhuǎn)錄酶、多重PCR擴(kuò)增引物、PCR反應(yīng)液、純化磁珠、NGS建庫接頭、陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于人甲狀腺癌基因融合試劑盒，其特征在于：所述試劑盒通過帶有分子標(biāo)簽的特異性引物對(duì)目標(biāo)序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)磁珠純化富集后進(jìn)行二輪PCR富集擴(kuò)增，最后經(jīng)磁珠純化得到測(cè)序文庫。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于人甲狀腺癌基因融合試劑盒，其特征在于：所述RNA逆轉(zhuǎn)錄和第一輪PCR(目標(biāo)區(qū)域的擴(kuò)增)反應(yīng)在單管內(nèi)完成。

5.一種用于人甲狀腺癌基因融合試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于：檢測(cè)流程包括以下步驟：

1)RNA的提取：應(yīng)用RNA提取試劑盒提取穿刺組織樣本中的RNA；

2)逆轉(zhuǎn)錄和特異性片段的擴(kuò)增：逆轉(zhuǎn)錄和第一輪PCR(特異性目的片段的擴(kuò)增)反應(yīng)在單管內(nèi)完成，以RNA為模板，帶有6個(gè)隨機(jī)堿基的融合3’端基因反向引物作為逆轉(zhuǎn)錄特異性引物，獲得cDNA；用特異性多重PCR引物和擴(kuò)增試劑對(duì)cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，得到特異性目的片段；

3)產(chǎn)物純化：在步驟(2)獲得的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中加入定量的磁珠進(jìn)行純化，去除RNA和殘余擴(kuò)增引物；

4)連接測(cè)序接頭：在步驟(3)獲得的純化產(chǎn)物中加入NGS建庫試劑中的特異性標(biāo)簽和接頭試劑，PCR擴(kuò)增得到文庫片段；

5)文庫檢測(cè)：將步驟(4)制備好的文庫用Qubit進(jìn)行定量，并用Agilient Bioanalyzer2100或同等功能的儀器進(jìn)行質(zhì)檢，檢測(cè)文庫的濃度以及文庫的片段大小，確保最終文庫片段在220-250bp范圍之間；

6)上機(jī)測(cè)序：將步驟(5)檢測(cè)合格的文庫環(huán)化后用華大MGI測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行高通量測(cè)序；

生物信息學(xué)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果分析。