[發(fā)明專利]逍遙丸的指紋圖譜檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010899581.2
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN114113356B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 金俊杰;蔡寶昌;胡玉凱;李國維;劉昊朋
• 申請（專利權(quán)）人: 南京海昌中藥集團有限公司;江蘇海昇藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/74
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 陸志斌

1.一種逍遙丸的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，它包括以下步驟：

步驟1、逍遙丸供試品溶液的制備：

取逍遙丸樣品適量，研細，粉末過篩，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇，浸漬后超聲處理，放冷，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，置于容量瓶，甲醇定容至刻度線，即得逍遙丸供試品溶液；

步驟2、逍遙丸對照品溶液的制備：

分別精密稱取甘草苷、芍藥苷、綠原酸、異甘草素、甘草酸銨、甘草次酸、芍藥內(nèi)酯苷、白術(shù)內(nèi)酯、藁本內(nèi)酯對照品，加甲醇分別制成對照品原液，精密吸取上述各成分對照品，置于容量瓶中，即得混合對照品溶液；

步驟3、對照品線性關(guān)系的建立

步驟4、分別精密吸取按步驟1方法得到的逍遙丸供試品溶液和步驟2的混合對照品溶液，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖；

步驟5、將步驟3中獲得的逍遙丸供試品溶液的指紋圖譜導(dǎo)出，并導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A；選擇不同批次逍遙丸的色譜圖中均存在的色譜峰作為共有峰；用平均值計算法生成逍遙丸的對照指紋圖譜，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積；并根據(jù)混合對照品溶液色譜圖的保留時間標注對照指紋圖譜中峰的化學(xué)成分。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種逍遙丸的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，

步驟1、逍遙丸供試品溶液的制備方法為：

取逍遙丸樣品適量，研細，粉末過50目篩，約1g，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，浸漬30min后超聲處理30min，放冷，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，置于10mL容量瓶，甲醇定容至刻度線，即得逍遙丸供試品溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種逍遙丸的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，

步驟2、混合對照品溶液的制備方法為：

分別精密稱取甘草苷、芍藥苷、綠原酸、異甘草素、甘草酸銨、甘草次酸、芍藥內(nèi)酯苷、白術(shù)內(nèi)酯和藁本內(nèi)酯對照品，加甲醇分別制成濃度為3mg/ml的對照品原液；精密吸取上述各對照品原液各100μL，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，即得混合對照品溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種逍遙丸的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，

步驟4、高效液相色譜儀檢測的色譜條件為：

色譜柱：YMC－Pack ODS－A，規(guī)格250mm×4.6mm，5μm；流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液；梯度洗脫：0.01～5min，5%乙腈；5～15min，5%～15%乙腈；15～45min，15%～35%乙腈；45～63min，35%～70%乙腈；63～75min，70%～76%乙腈；75～87min，76%～100%乙腈；體積流量為0.8ml/min；柱溫30℃；進樣量為10μL；檢測波長為254nm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種逍遙丸的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，

步驟3線性關(guān)系建立為：

精密吸取步驟（2）的混合對照品溶液2mL，1.5mL，1mL，0.5mL，0.2mL，0.1mL分別置于2mL量瓶中，用甲醇定容，即得不同梯度的混合對照品溶液，依次注入高效液相色譜儀；分別以對照品的峰面積Y和濃度X建立九個成分的線性回歸方程；其中，綠原酸線性回歸方程為Y=1E+07X+151750，r=0.9999；芍藥內(nèi)酯苷線性回歸方程為Y=928150X+243140，r=0.9997；芍藥苷線性回歸方程為Y=2E+06X+25598，r=0.9999；甘草苷線性回歸方程為Y=5E+06X+488841，r=0.9990；甘草酸銨線性回歸方程為Y=5E+06X-781599，r=0.9999；異甘草素線性回歸方程為Y=2E+07X+15081，r=0.9999；藁本內(nèi)酯線性回歸方程為Y=1E+07X+6919.7，r=0.9995；白術(shù)內(nèi)酯線性回歸方程為Y=4E+07X+23050，r=0.9999；甘草次酸線性回歸方程為Y=2E+07X+18419，r=0.9999。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種逍遙丸的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，其中5號峰為綠原酸、6號峰為芍藥內(nèi)酯苷、7號峰為芍藥苷、8號峰為甘草苷、11號峰為甘草酸銨、12號峰為異甘草素、15號峰為藁本內(nèi)酯、16號峰為白術(shù)內(nèi)酯、17號峰為甘草次酸。