[發(fā)明專利]用于靶向測(cè)序的通用雜交增強(qiáng)劑及方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010897277.4
• 申請(qǐng)日: 2020-08-31
• 公開（公告）號(hào): CN111961711A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧亞明;陳文浩;韓營(yíng)民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 伯科生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6874
• 分類號(hào): C12Q1/6874
• 代理公司: 北京北匯律師事務(wù)所 11711
• 代理人: 高元吉

1.一種用于靶向測(cè)序的通用雜交增強(qiáng)劑，其特征在于，所述通用雜交增強(qiáng)劑能夠與文庫中至少一個(gè)核酸片段的兩個(gè)末端結(jié)合，從而形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，所述通用雜交增強(qiáng)劑包括第一結(jié)合部或其互補(bǔ)序列、第二結(jié)合部或其互補(bǔ)序列和第三結(jié)合部或其互補(bǔ)序列，當(dāng)文庫中核酸片段的正鏈沿5’端至3’方向依次包括第一接頭、插入片段和第二接頭，且第一接頭沿5’端至3’方向依次包括序列A和序列B，第二接頭沿5’端至3’方向依次包括序列C和序列D時(shí)，所述第一結(jié)合部能夠同時(shí)與序列A或其部分連續(xù)序列和序列D或其部分連續(xù)序列互補(bǔ)結(jié)合，所述第二結(jié)合部能夠與序列B或其部分連續(xù)序列互補(bǔ)結(jié)合，所述第三結(jié)合部能夠與序列C或其部分連續(xù)序列互補(bǔ)結(jié)合。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于靶向測(cè)序的通用雜交增強(qiáng)劑，其特征在于，所述第一結(jié)合部、所述第二結(jié)合部和所述第三結(jié)合部中的至少之一包含核苷酸類似物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于靶向測(cè)序的通用雜交增強(qiáng)劑，其特征在于，所述核苷酸類似物選自LNA、BNA和MGB組成的組中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于靶向測(cè)序的通用雜交增強(qiáng)劑，其特征在于，所述第一結(jié)合部與所述第二結(jié)合部之間或所述第一結(jié)合部與所述第三結(jié)合部之間通過共價(jià)鍵或連接子連接；或者所述第一結(jié)合部與所述第二結(jié)合部之間和所述第一結(jié)合部與所述第三結(jié)合部之間各自通過共價(jià)鍵或連接子連接。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于靶向測(cè)序的通用雜交增強(qiáng)劑，其特征在于，所述共價(jià)鍵包括磷酸二酯鍵，所述連接子包括C3間隔臂。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于靶向測(cè)序的通用雜交增強(qiáng)劑，其特征在于，所述通用雜交增強(qiáng)劑的Tm值在70-90℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于靶向測(cè)序的通用雜交增強(qiáng)劑，其特征在于，所述通用雜交增強(qiáng)劑的3’末端含有封閉修飾。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于靶向測(cè)序的通用雜交增強(qiáng)劑，其特征在于，在序列A和序列B之間進(jìn)一步包含第一索引序列，和/或在序列C和序列D之間進(jìn)一步包含第二索引序列。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于靶向測(cè)序的通用雜交增強(qiáng)劑，其特征在于，在序列A和序列B之間和/或在序列C和序列D之間進(jìn)一步包括單分子標(biāo)簽。

10.一種靶向測(cè)序方法，其特征在于，包括使根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的通用雜交增強(qiáng)劑與文庫反應(yīng)的步驟。