[發明專利]煙草黑脛病預警基因Ntab0278480及其應用

有效

• 申請號: 202010896092.1
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN111961744B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 魏攀;謝小東;王燃;李鋒;金立鋒;董臣;楊軍;羅朝鵬;王中;武明珠
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/29;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 張曉萍

1.煙草黑脛病預警基因Ntab0278480，其特征在于，其堿基序列如SEQ ID No.2所示，具體如下：

GTTTAGAACTCGGCAGCGTTTCGATACGTTCGTACGCTTTCGATATCGTCAGAGACGAAATAAGAAATCGGCTCATTCCACTTTTAGAAAGTAACCAGAATGGCACCGTTTTGGATTTGCAAGATGTTTTTAGGCGATTCTCGTTTGATAGTATATGTAAATTCTCTTTTGGAATGGATCCGGGTTGCTTG。

2.權利要求1所述煙草黑脛病預警基因Ntab0278480在煙草黑脛病防治中應用，其特征在于，作為預警基因用于指示黑脛病的感染情況。

3.針對權利要求1所述煙草黑脛病預警基因Ntab0278480的檢測用PCR引物，其特征在于，具體引物序列為：

Ntab0278480-F：5’-GTTTAGAACTCGGCAGCGTT-3’，

Ntab0278480-R：5’-CAAGCAACCCGGATCCATTC-3’。

4.利用權利要求3所述檢測用PCR引物所制備的qRT-PCR檢測試劑盒。

5.如權利要求4所述qRT-PCR檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括檢測參考基因L25用引物，具體引物序列為：

L25-F：5’-CCCCTCACCACAGAGTCTGC-3’，

L25-R：5’-AAGGGTGTTGTTGTCCTCAATCTT-3’。

6.利用權利要求3所述檢測用PCR引物的煙草黑脛病檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

（一）提取待檢煙葉樣品總RNA，并反轉錄cDNA；

（二）以正常生長未感染煙株煙葉樣品作為對照，以L25為參考基因，利用Ntab0278480-F/R引物對進行qRT-PCR檢測，計算Ntab0278480的相對表達量；

所述參考基因L25，為利用如下引物序列PCR擴增所得基因：

L25-F：5’-CCCCTCACCACAGAGTCTGC-3’，

L25-R：5’-AAGGGTGTTGTTGTCCTCAATCTT-3’；

（三）依據步驟（三）中表達量情況判定待檢樣品黑脛病感染情況，具體而言：

相較于對照組，如果Ntab0278480的相對表達量變化不具有統計學意義，則表明待檢樣品未感染黑脛??；

如果Ntab0278480的相對表達量升高低于1.5倍，則需停留不少于6h后重新檢測判定；

如果Ntab0278480的相對表達量升高不低于1.5倍，則按照如下情況判定黑脛病發病階段；

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