[發(fā)明專利]煙草黑脛病預(yù)警基因Ntab0278480及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010896092.1
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN111961744B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏攀;謝小東;王燃;李鋒;金立鋒;董臣;楊軍;羅朝鵬;王中;武明珠
• 申請（專利權(quán)）人: 中國煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/29;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 張曉萍

本發(fā)明屬于煙草基因組解析和煙草栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一個煙草黑脛病預(yù)警基因及其應(yīng)用專利申請事宜。煙草黑脛病預(yù)警基因Ntab0278480的堿基序列如SEQ ID No.2所示，作為預(yù)警基因用于指示黑脛病的感染情況。本申請所提供的預(yù)警基因，具有響應(yīng)快速、靈敏度高的技術(shù)優(yōu)點，而且由于是檢測煙草基因組（現(xiàn)有技術(shù)，多是檢測病菌基因組），因此具有便捷的技術(shù)優(yōu)勢。本申請不僅可為黑脛病的監(jiān)測和早期預(yù)防奠定一定技術(shù)基礎(chǔ)，也為其他煙草病害防控提供了借鑒和參考，因此具有較好的應(yīng)用和科研價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于煙草基因組解析和煙草栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一個煙草黑脛病預(yù)警基因及其應(yīng)用專利申請事宜。

背景技術(shù)

煙草栽培中，真菌、細(xì)菌和病毒等多種微生物都會導(dǎo)致煙草病害的發(fā)生，同時，蚜蟲等具有刺吸式口器的昆蟲也會向煙草傳播病原體并進而導(dǎo)致其產(chǎn)生病害。而由于微生物個體小，再加上煙草病害的傳播途徑多樣，給煙草病害的發(fā)生和流行規(guī)律研究帶來不小的困難。現(xiàn)有技術(shù)中，一般采用病情指數(shù)等指標(biāo)來反映病害的發(fā)生、發(fā)展和流行規(guī)律，但這種評價方法通常要等到發(fā)病、甚至開始蔓延后才能夠?qū)Σ『Φ陌l(fā)生或流行做出判斷，而這往往容易延誤后續(xù)的防治。理論而言，如果能在病原體侵染煙草早期時，就能夠通過及時檢測到并做出預(yù)警，可為后續(xù)病害跟蹤、病害發(fā)展及流行趨勢判斷奠定良好基礎(chǔ)，也可為控制病害大規(guī)模的蔓延爭取到足夠的時間。

煙草黑脛病是一類土傳真菌性病害，又稱煙草疫病，是世界煙草生產(chǎn)中最具毀滅性的病害之一，也是危害我國煙葉生產(chǎn)的主要病害，在國內(nèi)主要產(chǎn)煙區(qū)均有發(fā)生，發(fā)病后主要癥狀為：煙草矮化、根和莖基部壞死、葉片發(fā)黃萎蔫，平均發(fā)病率為3%～12%，嚴(yán)重時可達(dá)50%以上。煙草黑脛病能夠使煙株根系活力下降，水分和營養(yǎng)物質(zhì)運輸受阻，直接或間接地影響到煙葉的產(chǎn)量和質(zhì)量，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。

研究表明，煙草黑脛病的傳播途徑多樣，主要初侵染源是帶菌的土壤、糞肥及灌溉水，其次為帶病煙苗，其產(chǎn)生的孢子囊和游動孢子借雨水或灌溉水傳播，可引起再浸染。由于該病害傳播范圍廣，傳播途徑多樣，在煙株體內(nèi)增殖和轉(zhuǎn)移速度很快，因此提前預(yù)防和盡早預(yù)警是該病防治的關(guān)鍵。

現(xiàn)有研究中，針對煙草真菌性病害分子生物學(xué)檢測技術(shù)大多數(shù)是基于核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（rDNA-ITS）序列設(shè)計開發(fā)特異性引物，再利用PCR擴增技術(shù)進行檢測判定。當(dāng)然，也有根據(jù)某些特定保守基因序列比對后結(jié)果再設(shè)計特異性引物進行PCR擴增、檢測和判定所感染真菌類型的。但這些方法多是基于所鑒定病菌真菌自身基因所進行的病害鑒定，實際應(yīng)用中，也就意味著，只有當(dāng)煙草感染這種病原真菌、且能夠提取獲得該病原真菌基因組后才能利用PCR方法進行鑒定，從而導(dǎo)致該此類方法在應(yīng)用時具有很大局限性。因此，如何更為快速的對煙草所能遭受的病原真菌進行鑒定，對于相關(guān)病害防控具有十分重要的技術(shù)意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對煙草黑脛病，本申請目的在于提供兩個能夠在黑脛病感染早期即可快速響應(yīng)的預(yù)警基因，從而為黑脛病的早期預(yù)防奠定良好技術(shù)基礎(chǔ)。

本申請所采取的技術(shù)方案詳述如下。

煙草黑脛病預(yù)警基因Ntab0295850和Ntab0278480，其堿基序列分別如SEQ IDNo.1和SEQ ID No.2所示，具體如下：

Ntab0295850基因序列（237 bp，SEQ ID No.1），具體如下：

GGCTATGGAAATGTATCGGCGAATCATCGGAACATGAACAAGAGGATGATGGAGTTTTTGAAAAAGAGTTGGATTCCTAAAATTGGAGAAGTGAAAATGGAAAGAGAGAAAGTGCATAAACATATGATTAAAGAGAGGATTAGAAGAGAAAAGCAGAAGCAGAGTTATTTGGATTTGCATAAATTGCTCCCAATGGGAACCAAGGGTGAGAAGAATGCTATAGTCCAAACAGCAGCA；

Ntab0278480基因序列（191 bp，SEQ ID No.2），具體如下：