[發明專利]促內皮細胞產外泌體的方法、外泌體制劑和應用

有效

• 申請號: 202010894371.4
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN112029705B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 仉紅剛;張秋菊;李炳蔚;修瑞娟
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院微循環研究所
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K35/44;A61P9/14
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 姜展志

本發明公開了促內皮細胞產外泌體的方法、外泌體制劑和應用，其中，促內皮細胞產外泌體的方法，包括如下操作步驟：步驟1：取人臍靜脈內皮細胞株進行貼壁培養及傳代；步驟2：向步驟1所培養的貼壁細胞的培養液中加入三七總皂甙，然后在培養箱中繼續培養；步驟3：從步驟2所得培養液中分離純化出外泌體。通過往人臍靜脈內皮細胞的傳代培養液中加入三七總皂甙來誘導人臍靜脈內皮細胞分泌外泌體，其分泌量顯著提高。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，尤其涉及一種促內皮細胞產外泌體的方法、外泌體制劑和應用。

背景技術

目前，生物治療已經成為生物醫藥領域重要的研究、開發和應用內容，隨著全球范圍內生物細胞技術和產業快速發展，我國國家級主管部門及地方也陸續頒布多項扶持政策支持細胞治療的發展。

細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據它們的大小和發生分為三類，包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細胞分泌，內含有特定的蛋白質、脂質、細胞因子或遺傳物質。來源于不同的組織的外泌體不僅具有其特異性蛋白和核酸，而且還包含其行使功能的關鍵分子。

外泌體是納米級大小的膜封閉囊泡，含有生物活性分子，包括蛋白質，RNA和miRNA等。它們充當信使來調節鄰近細胞和遠端靶細胞的功能。臨床前研究表明，在某些情況下，外源性給予的外泌體可以重新指導細胞活動，從而發揮其治療潛力。由外泌體介導的遞送具有以下幾個優點：1、具有高度生物相容性，如果它們來自適當的細胞[例如間充質干細胞(MSCs)或未成熟的樹突狀細胞(DC)]，則同時具備免疫惰性；2、能夠穿越人體厚實的組織屏障，如血腦屏障(BBB)等。正常情況下，外泌體可以直接用作潛在治療劑。

外泌體具有非常廣闊的治療前景和市場，但產量是制約其應用的重要問題，國際上也都在尋找有效的提高外泌體產量的技術方法。至今國內外，只有美國俄亥俄州立大學化學與生物工程學院的James Lee課題組發明了一種細胞納米化生物芯片，在數量級上提高外泌體生產和核酸包載效率，在靶向性和療效上大大超越目前臨床實驗正在測試的外泌體包載的基因治療藥物，這些結果在2019年12月16日發表在《Nature BiomedicalEngineering》上(Zhaogang Yang,et al.Large-scale generation of functionalmRNA-encapsulating exosomes via cellular nanoporation)，但至今以生物藥物誘導的方法提高細胞外泌體產量的技術尚少見報道。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明的目的在于提供一種提高內皮細胞外泌體活性制劑產量的制備方法。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下：一種促內皮細胞產外泌體的方法，其特征在于，包括如下操作步驟：

步驟1：取人臍靜脈內皮細胞株進行貼壁培養及傳代；

步驟2：向步驟1所培養的貼壁細胞的培養液中加入三七總皂甙，然后在培養箱中繼續培養；

步驟3：從步驟2所得培養液中分離純化出外泌體。

上述技術方案中所述步驟1中傳代培養的內皮細胞為人臍靜脈內皮細胞株。

上述技術方案中所述步驟1中培養液為內皮細胞培養基。

上述技術方案中所述步驟2中培養液中的三七總皂甙的濃度為0.4mg/mL，所述培養液在加入三七總皂甙后繼續培養24h。