[發明專利]促內皮細胞產外泌體的方法、外泌體制劑和應用有效
| 申請號： | 202010894371.4 | 申請日： | 2020-08-31 |
| 公開（公告）號： | CN112029705B | 公開（公告）日： | 2021-10-08 |
| 發明（設計）人： | 仉紅剛;張秋菊;李炳蔚;修瑞娟 | 申請（專利權）人： | 中國醫學科學院微循環研究所 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;A61K35/44;A61P9/14 |
| 代理公司： | 北京輕創知識產權代理有限公司 11212 | 代理人： | 姜展志 |
| 地址： | 100005 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 內皮 細胞 產外泌體 方法 體制 應用 | ||
1.促內皮細胞產外泌體的方法，其特征在于，包括如下操作步驟：
步驟1：取人臍靜脈內皮細胞株進行貼壁培養及傳代；
步驟2：向步驟1所培養的貼壁細胞的培養液中加入三七總皂甙至培養液中的三七總皂甙的濃度為0.4mg/mL，然后在培養箱中繼續培養24h；
步驟3：從步驟2所得培養液中分離純化出外泌體。
2.根據權利要求1所述的促內皮細胞產外泌體的方法，其特征在于，所述步驟1中傳代培養的內皮細胞為人臍靜脈內皮細胞株。
3.根據權利要求1所述的促內皮細胞產外泌體的方法，其特征在于，所述步驟1中培養液為內皮細胞培養基。
4.根據權利要求1所述的促內皮細胞產外泌體的方法，其特征在于，所述步驟3中外泌體的分離純化的具體步驟如下：收集所述步驟2中完成培養后培養液的上清液，于4℃條件下以3000 g離心10 min，離心后取上清液，并往離心后的上清液中加入ECS試劑并混勻，混勻后在2-8℃條件下靜置1-3h，其中，所述ECS試劑的添加量為離心后上清液的體積比為1:4，靜置完成后將其在4℃條件下以10000 g離心60 min，離心后棄上清液，并加入 PBS溶液均勻吹打離心所得沉淀物，所述PBS溶液的用量為ECS試劑用量的1/25,然后在4℃條件下以12000 g離心2 min，取上清液，將所得上清液轉入EPF柱上室中，于4℃條件下以3000 g離心10 min，離心后收集EPF柱管底的液體，所收集的液體即為純化后的外泌體。
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