[發明專利]一種添加兒茶素沒食子酸酯提高變色栓菌漆酶產量的方法

在審

• 申請號: 202010893486.1
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN111925976A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 王鋒;李湘;徐玲
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N1/38
• 分類號: C12N1/38;C12N1/14;C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種添加兒茶素沒食子酸酯提高變色栓菌漆酶產量的方法，其特征在于按照下述步驟進行

(1)將預培養的變色栓菌菌絲體接種到漆酶發酵培養基中，進行發酵培養；

(2)在所述發酵培養過程的菌絲體生長階段，向發酵液中添加兒茶素沒食子酸酯溶液；

(3)在菌絲體對數生長期結束并進入漆酶主要合成階段后，選擇適于漆酶表達和分泌的發酵培養條件和發酵培養時間，并繼續培養以產生漆酶；

(4)培養至發酵液中漆酶活力達到峰值時，結束發酵并收集固態發酵基質。

2.根據權利要求所述的一種添加兒茶素沒食子酸酯提高變色栓菌漆酶產量的方法，其特征在于所述步驟(1)中所述變色栓菌菌絲體預培養物培養方法，按照下述步驟進行：

斜面菌絲體的活化方法如下：采用常用土豆葡萄糖瓊脂(PDA)培養基配置方法配制斜面菌絲體活化用培養基，其中土豆200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂粉15g/L；將變色栓菌(CICC14001)菌絲(0.5cm x 1cm)1塊接種到該培養基試管斜面上，30℃培養7天；

采用常用土豆葡萄糖培養基配制方法配制菌絲預培養用的培養基，其中土豆200g/L、葡萄糖20g/L；將活化后的斜面菌絲體(0.5cm x 1cm)3塊接種于100mL土豆葡萄糖培養基中，于25℃、150r/min條件下培養7天；將該培養物均質后按10％(v/v)接種量再次轉接入新鮮的土豆葡萄糖培養基中，于25℃、150r/min條件下培養5天，即得預培養的菌絲體，用于漆酶固態發酵。

3.根據權利要求所述的一種添加兒茶素沒食子酸酯提高變色栓菌漆酶產量的方法，其特征在于所述步驟(1)中所述漆酶固態發酵培養基：麥麩和基礎無機鹽培養基按1:3(w/w)比例混合；其中基礎無機鹽培養基組成為Ca(NO₃)₂^.4H₂O 0.5g/L、KH₂PO₄ 0.5g/L、MgSO₄^.7H₂O0.5g/L，其余為水。

4.根據權利要求所述的一種添加兒茶素沒食子酸酯提高變色栓菌漆酶產量的方法，其特征在于所述步驟(1)中發酵培養的具體條件：發酵培養基起始pH為6.1～8.0，優選為6.5～7.5，更優選為6.5～7.0。

5.根據權利要求所述的一種添加兒茶素沒食子酸酯提高變色栓菌漆酶產量的方法，其特征在于所述步驟(1)中所述變色栓菌菌絲體接種后發酵基質中的初始生物量為0.02～0.15mg/g，優選為0.02～0.06mg/g，更優選為0.03～0.05mg/g。

6.根據權利要求所述的一種添加兒茶素沒食子酸酯提高變色栓菌漆酶產量的方法，其特征在于所述發酵培養過程中菌絲體生長溫度為22～28℃，優選為24～28℃，更優選為25～27℃；

所述發酵培養過程中菌絲體培養的時間為24～96h，優選為36～74h，更優選為44～40h；一般地，變色栓菌漆酶發酵過程中，從接種到完成菌絲體生長需要24～48h的時間。

7.根據權利要求所述的一種添加兒茶素沒食子酸酯提高變色栓菌漆酶產量的方法，其特征在于所述步驟(2)中向發酵液中添加兒茶素沒食子酸酯溶液為一次性或分多次添加，分多次添加時，每次加入后攪拌均勻，優選一次性添加；

所述兒茶素沒食子酸酯母液采用0.22μm濾膜過濾除菌；

所述兒茶素沒食子酸酯添加的終濃度為1～10mg/L，進一步優選為2～5mg/L，更進一步優選為4～5mg/L。

8.根據權利要求所述的一種添加兒茶素沒食子酸酯提高變色栓菌漆酶產量的方法，其特征在于所述步驟(2)中兒茶素沒食子酸酯溶液的添加時間為所述步驟(1)中發酵培養過程的第24～72h，優選為第40～66h，更優選為第45～60h。