[發明專利]一種發酵法與酶法聯合制備貝類高F值寡肽的方法

有效

• 申請號: 202010891927.4
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN111979286B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 劉海梅;曹亞男;裴繼偉;趙芹;張莉莉;孫雪梅;牛麗紅;劉兆勝
• 申請（專利權）人: 魯東大學;山東深海生物科技股份有限公司;煙臺市海洋經濟研究院（煙臺市海洋科學技術研究所;煙臺市漁業技術推廣站;煙臺市水生動物疫病防控中心）
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12R1/225
• 代理公司: 煙臺上禾知識產權代理事務所(普通合伙) 37234
• 代理人: 毛毛

本發明公開了一種發酵法與酶法聯合制備貝類高F值寡肽的方法，包括內切酶酶解與外切酶酶解，在外切酶酶解的過程中使用瑞士乳桿菌。本發明將瑞士乳桿菌應用于貝類高F值寡肽的生產，將發酵產酶和酶解合成一步，有效脫除了芳香族氨基酸，不需單獨使用吸附劑進行脫芳；同時有效脫除了產品的苦味。本發明簡化了高F值寡肽的生產工序，大幅度降低了生產成本。

技術領域

本發明屬于活性肽制備領域，具體涉及一種發酵法與酶法聯合制備貝類高F值寡肽的方法。

背景技術

高F值寡肽是由2-9個氨基酸殘基組成的寡肽混合物，其中支鏈氨基酸（纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸）與芳香族氨基酸（苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸）的摩爾比值一般大于20，此比值比人體模式中的比值高，該肽可以應用于改善肝病患者的營養狀況和肝損傷、輔助肝性腦病及苯丙酮尿癥的治療等多個方面，且具有抗疲勞、抗衰老、解酒等生理功能，可用以開發肝病全營養配方食品、功能性食品、藥物等，市場前景巨大。

目前，高F值寡肽的生產主要通過內切酶和外切酶兩步酶解法來實現芳香族氨基酸的游離，再通過活性炭、超濾等方法去除芳香族氨基酸，這種生產方法要求酶具有與底物的特異性識別位點，酶的使用量大，不能重復利用，易引起產品出現苦味，需要進行脫芳、脫苦等分離純化步驟，工序復雜，從而導致生產成本較高。為了降低酶的使用量，可以利用固定化酶進行酶解，但其他的問題依然存在。

發明內容

本發明針對上述現有技術存在的不足，解決酶解體系中酶解方法的局限性、簡化工序、降低成本等問題，提供一種發酵法與酶法聯合制備貝類高F值寡肽的方法。

本發明利用瑞士乳桿菌（Lactobacillus helveticus）生長過程中產生的強大酶系，通過發酵法與酶法聯合在發酵體系中一次性獲得無苦味的貝類高F值寡肽，開發了一種新型的高F值寡肽生產方法。該方法將產酶和酶解合成一步，省去了分離純化過程，大幅度降低了生產成本。

具體技術方案如下：

一種發酵法與酶法聯合制備貝類高F值寡肽的方法，包括內切酶酶解與外切酶酶解，在外切酶酶解的過程中使用瑞士乳桿菌。

本發明包括如下步驟：

（1）將去殼貝肉破碎，并與水混合，得料漿；

（2）將內切酶加入步驟（1）獲得的料漿中，進行酶解；

（3）調節步驟（2）獲得的體系的pH值為6-8，加入外切酶、培養基和瑞士乳桿菌，在35-45℃條件下培養20-30 h；滅菌滅酶，離心分離，得發酵液；

（4）對發酵液進行超濾去除大分子蛋白。

本發明在外切酶酶解的同時使用瑞士乳桿菌進行發酵，利用生長過程中產生的強大酶系，發酵法與酶法聯合在發酵體系中一次性獲得無苦味的貝類高F值寡肽，其機理應為瑞士乳桿菌在生長代謝過程中產生的酶系能起到內外雙切芳香族氨基酸的作用，在外源蛋白酶的作用下，共同將芳香族氨基酸游離出來，又在生長過程中將芳香族氨基酸和苦味氨基酸作為底物進行消化吸收利用，從而實現芳香族氨基酸和苦味氨基酸的脫除。本發明方法得到的寡肽其F值在22以上，不需使用活性炭等吸附劑或納濾方法進行芳香族氨基酸的脫除。

進一步，步驟（2）中，所述的內切酶為胃蛋白酶，其用量為以去殼貝肉計500-800U/g。

再進一步，步驟（2）的酶解條件為調節pH值為2-3.5，在35-45℃條件下酶解6-9 h。

進一步，步驟（3）中所述的外切酶為風味蛋白酶，其用量為以去殼貝肉計300-500U/g。