[發明專利]一種快速檢測A1和A2型β-酪蛋白基因型奶牛的方法

在審

• 申請號: 202010888605.4
• 申請日: 2020-08-28
• 公開（公告）號: CN111961734A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 劉繼強
• 申請（專利權）人: 北京康普森農業科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858
• 代理公司: 天津垠坤知識產權代理有限公司 12248
• 代理人: 于德江

本發明創造提供了一種快速檢測A1和A2型β?酪蛋白基因型奶牛的方法，涉及分子標記育種技術領域，以解決現有技術中存在的檢測β?酪蛋白基因方法在實際生產應用中存在樣本處理時間長而且檢測成本高的技術問題，該方法步驟：S1:建立樣本DNA快速提取體系，該體系包括DNA Extract Solution A和DNA Extract Solution B；S2：根據β?酪蛋白基因堿基序列，設計用于PCR擴增的引物；S3：設置空白對照；S4：建立PCR擴增體系和擴增程序；S5：熒光信號掃描，得到β?酪蛋白基因分型。本發明創造能夠大大的縮短樣本DNA常規提取消耗的時間，檢測準確率達到99.9％以上，可以支持高通量研究和少量樣本的重復性實驗。

技術領域

本發明創造屬于分子標記育種領域，尤其是涉及一種快速檢測A1和A2型β-酪蛋白基因型奶牛的方法。

背景技術

β-酪蛋白約占牛奶乳蛋白總量的24％～28％，文獻報道，已鑒定出β酪蛋白的12種亞型，可根據相應位置氨基酸的變異來確定每一種亞型。按67位氨基酸的突變可分為A1(組氨酸)或A2(脯氨酸)型，其中A2型為野生型，A1型為突變型。有研究表明，A1型奶牛生產的牛奶在消化過程中可以產生β-酪啡肽(BCM-7)，BCM-7能夠被人體直接吸收，有報道稱其可能與孤獨癥、精神分裂癥、選擇言語困難、多動癥、自殘、I型糖尿病、冠心病等非傳染性疾病的發生有關。

目前檢測β-酪蛋白基因多態性位點分型的方法主要有測序法、限制性酶切法、熒光定量PCR方法、質譜檢測法等，然而上述方法在實際生產應用中存在樣本處理時間長而且檢測成本高的問題。因此，現有的β-酪蛋白基因多態性位點分型的方法需要進一步改善。

發明內容

有鑒于此，本發明創造旨在提出一種快速檢測A1和A2型β-酪蛋白基因型奶牛的方法，以解決上述背景技術中提出的技術問題。本發明提供的諸多技術方案中的優選技術方案所能產生的諸多技術效果詳見下文闡述。

為達到上述目的，本發明創造的技術方案是這樣實現的：

一種快速檢測A1和A2型β-酪蛋白基因型奶牛的方法，具體步驟如下：

S1：建立樣本DNA快速提取體系，該體系包括DNA Extract Solution A和DNAExtract Solution B；

S2：根據β-酪蛋白基因堿基序列，設計用于PCR擴增的引物；

S3：設置空白對照；

S4：建立PCR擴增體系和擴增程序；

S5：熒光信號掃描，得到β-酪蛋白基因分型。

進一步的，所述所述步驟S1中，所述樣本DNA快速提取體系建立方法如下：

S11:取3mm牛血卡或者20μL牛血液加入1.5mL離心管中；

S12：加入50μLDNA Extract Solution A，簡短震混，95℃孵育5min；

S13:加入50μLDNA Extract Solution B，簡短震混后瞬離取上清,作為PCR擴增的模板，加入配制好的PCR反應體系；

S14:S1所述的DNA快速提取體系來源于康為世紀的快速DNA提取試劑盒(貨號：CW3011M)。

進一步的，所述步驟S2中，設計的所述PCR擴增引物包括3種：SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2和SEQ ID No.3。

進一步的，所述步驟S4中,建立所述PCR體系，所述PCR體系包括2.5uL DNA、2.5uLKASP Master Mix(LGC Genomics,Hoddeston,UK)以及0.07uL 3種混合引物。