[發明專利]一種快速檢測A1和A2型β-酪蛋白基因型奶牛的方法在審
| 申請號： | 202010888605.4 | 申請日： | 2020-08-28 |
| 公開（公告）號： | CN111961734A | 公開（公告）日： | 2020-11-20 |
| 發明（設計）人： | 劉繼強 | 申請（專利權）人： | 北京康普森農業科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 天津垠坤知識產權代理有限公司 12248 | 代理人： | 于德江 |
| 地址： | 102200 北京市昌平區*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 檢測 a1 a2 蛋白 基因型 奶牛 方法 | ||
1.一種快速檢測A1和A2型β-酪蛋白基因型奶牛的方法，其特征在于，具體步驟如下：
S1：建立樣本DNA快速提取體系，該體系包括DNA Extract Solution A和DNA ExtractSolution B；
S2：根據β-酪蛋白基因堿基序列，設計用于PCR擴增的引物；
S3：設置空白對照；
S4：建立PCR擴增體系和擴增程序；
S5：熒光信號掃描，得到β-酪蛋白基因分型。
2.根據權利要求1所述的快速檢測A1和A2型β-酪蛋白基因型奶牛的方法，其特征在于：
所述步驟S1中，所述樣本DNA快速提取體系建立方法如下：
S11:取3mm牛血卡或者20μL牛血液加入1.5mL離心管中；
S12：加入50μL DNA Extract Solution A，簡短震混，95℃孵育5min；
S13:加入50μL DNA Extract Solution B，簡短震混后瞬離取上清,作為PCR擴增的模板，加入配制好的PCR反應體系；
S14:S1所述的DNA快速提取體系來源于康為世紀的快速DNA提取試劑盒(貨號：CW3011M)。
3.根據權利要求1所述的快速檢測A1和A2型β-酪蛋白基因型奶牛的方法，其特征在于：所述步驟S2中，設計的所述PCR擴增引物包括3種：SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ IDNo.3。
4.根據權利要求1所述的快速檢測A1和A2型β-酪蛋白基因型奶牛的方法，其特征在于，所述步驟S4中,建立所述PCR體系，所述PCR體系包括2.5uL DNA、2.5uL KASP Master Mix(LGC Genomics,Hoddeston,UK)以及0.07uL 3種混合引物。
5.根據權利要求1所述的快速檢測A1和A2型β-酪蛋白基因型奶牛的方法，其特征在于，所述步驟S4中,所述PCR擴增程序包括：
94℃預變性15min，94℃變性20s,55-61℃退火和延伸60s,進行10個循環；
94℃變性20s，55℃退火和延伸60s，進行26個循環；
94℃變性20s，57℃退火和延伸60s，進行3個循環。
6.根據權利要求1所述的快速檢測A1和A2型β-酪蛋白基因型奶牛的方法，其特征在于：所述步驟S5中，熒光信號掃描參照《ABI7900HT Fast Real Time PCR System實驗室操作規程》進行數據掃描得到β-酪蛋白基因多態性位點分型結果。
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