[發明專利]分泌表達豬源性抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體的重組乳酸乳球菌及其制備方法

有效

• 申請號: 202010883971.0
• 申請日: 2020-08-28
• 公開（公告）號: CN112011497B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 朱建國;張凡慶;王鳳青;張蕾;閆潔新;程曼玲
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/62;C12N15/74;C07K19/00;C07K16/12;C12R1/46
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 褚明偉

本發明涉及分泌表達豬源性抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體的重組乳酸乳球菌及其制備方法，屬于基因工程技術領域。所述重組乳酸乳球菌攜帶分泌表達抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體的融合序列，所述融合序列具有如SEQ ID No.1所示序列與如SEQ ID No.2所示的單鏈抗體序列，其中，如SEQ ID No.1所示序列為含有分泌信號肽USP45、分泌增強信號肽LEISSTCDA和硫氧還蛋白基因的序列。獲得的分泌的抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛的單鏈抗體分子量約為45kDa，能特異性的識別產腸毒素大腸桿菌，阻斷細菌的感染，以及對仔豬產腸毒素大腸桿菌病提供保護作用。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，涉及一種豬源性抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛的單鏈抗體、豬源性抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛的單鏈抗體的制備方法、分泌表達抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體的重組乳酸乳球菌的制備方法、編碼該分泌表達抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體的基因、分泌表達抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體的表達載體和宿主細胞。

背景技術

大腸桿菌最早由Theodore Escherich在1885年從糞便分離得到，人們為了紀念他的研究，以他的名字命名大腸桿菌為Escherichia coli。一些大腸桿菌是腸道正常菌群的組成成分，另一些大腸桿菌會引起腹瀉，最常見的致病性大腸桿菌是產腸毒素大腸桿菌(enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)。產腸毒素大腸桿菌的毒力因子主要有黏附素和腸毒素。黏附素是引起腸道感染的先決因素。其中K88菌毛和K99菌毛是ETEC最重要的黏附性毒力因子。ETEC的防控依靠抗生素，然而抗生素的大量使用容易導致ETEC產生耐藥性，并且抗性基因在細菌間的傳播會對公共安全造成威脅。

單鏈抗體是一種基因工程抗體，以其分子量小、特異性高、穿透力強、易于改造等特點，顯示了巨大的應用潛力，越來越受到人們的重視。

中國專利CN106008710B即公開了一種豬源性抗產腸毒素大腸桿菌K88 FaeG蛋白的單鏈抗體及其制備方法，該專利中的抗產毒素大腸桿菌K88FaeG蛋白的單鏈抗體由抗體的重鏈可變區VH和輕鏈可變區VL通過短的連接肽連接而成。輕鏈可變區VL的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示，重鏈可變區VH的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。獲得的抗產腸毒素大腸桿菌K88FaeG蛋白的單鏈抗體分子量約為28kDa，能夠特異性的識別產腸毒素大腸桿菌K88，可用于阻斷產腸毒素大腸桿菌K88的感染和粘附。

然而單鏈抗體口服時可能會受到胃部酸性環境和蛋白酶的破壞，使其效果受到影響。

發明內容

本發明的目的就是為了克服單鏈抗體口服時容易受到破壞的技術問題而提供一種分泌表達豬源性抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體的重組乳酸乳球菌及其制備方法。

本發明所述重組乳酸乳球菌分泌的豬源性抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體能夠與產腸毒素大腸桿菌特異性結合，可用于阻斷產腸毒素大腸桿菌的感染，以及對仔豬感染病毒提供保護作用。

所述豬源性抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體具有與抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛特異性結合活性。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

本發明提供一種分泌表達豬源性抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體的重組乳酸乳球菌，所述重組乳酸乳球菌攜帶分泌表達抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體的融合序列，所述融合序列具有如SEQ ID No. 1所示序列與如SEQ ID No. 2所示的單鏈抗體序列，其中，如SEQ ID No. 1所示序列為含有分泌信號肽USP45、分泌增強信號肽LEISSTCDA和硫氧還蛋白基因的序列。

其中，分泌表達抗產腸毒素大腸桿菌K88菌毛單鏈抗體的融合序列具有與產腸毒素大腸桿菌結合的活性。