[發明專利]一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法

在審

• 申請號: 202010878614.5
• 申請日: 2020-08-27
• 公開（公告）號: CN111978424A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 孫小玲;王寧寧;孔芒芒;董凡
• 申請（專利權）人: 上海應用技術大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 陳天寶

本發明涉及一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，該方法包括以下步驟：制備鐵皮石斛水溶性粗多糖；配制高速逆流色譜溶劑體系，設置高速逆流色譜儀參數；配制鐵皮石斛水溶性粗多糖的樣品溶液，經高速逆流色譜一步純化鐵皮石斛水溶性多糖；獲得的鐵皮石斛水溶性多糖溶液流分經合并、透析、干燥，得到純化后的鐵皮石斛水溶性多糖。與現有技術相比，本發明操作簡單，工藝綠色環保無污染，分離效率好，回收率高，所獲得的鐵皮石斛水溶性多糖的純度達90％以上，可用于鐵皮石斛多糖的結構分析與鑒定。

技術領域

本發明涉及天然產物有效成分的提取和純化領域，尤其是涉及一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法。

背景技術

鐵皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)屬氣生蘭科草本植物，又名鐵皮蘭、黑節草，是一種具有藥食同源屬性的名貴中藥材，其主要化學成分有多糖類、生物堿類、氨基酸類和揮發性成分等。鐵皮石斛主要有抗衰老、抗氧化、抗腫瘤、降糖降脂、護膚保濕、保肝護胃、增強體質等功效，具有較高的經濟價值。

鐵皮石斛多糖是鐵皮石斛的主要活性成分，現有提取鐵皮石斛多糖的方法中，存在著多糖提取率低，提取的多糖中雜質含量高等不足。目前對鐵皮石斛中多糖類成分的分離純化的方法主要有凝膠色譜法和離子交換色譜法。但是這兩種方法操作復雜、分離效果不佳且應用有所局限性。

高速逆流色譜(High-Speed Countercurrent Chromatography，HSCCC)是一項新型液-液分配色譜技術，HSCCC不需要固體支撐體，因此采用HSCCC分離天然產物具有重現性好、分離度高、分離量大、操作靈活、分離快速、回收率高和適用范圍廣等特點，目前在生物制藥、天然活性成分分離、食品和化妝品等方面得到了廣泛應用。

CN110818812A公開了一種鐵皮石斛精制多糖提取物的方法，將鐵皮石斛粉末加水提取后，往提取物濃縮液中加入sevage試劑重復操作多次脫蛋白，在脫除蛋白的同時，損失了部分多糖；并且采用陰離子交換樹脂和葡聚糖凝膠樹脂對粗多糖進行分離純化，得到鐵皮石斛精制多糖，此方法不僅操作復雜，還存在著效率低、成本高等缺點。

發明內容

本發明的目的就是為了解決上述問題而提供一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，以克服現有技術中分離純化方法在鐵皮石斛多糖純化過程中存在的操作復雜、純度低、容易破壞多糖結構等不足，本方法中鐵皮石斛粉末只需經過無水乙醇處理，熱水浸提獲得粗多糖后，可以直接采用高速逆流色譜技術一步純化鐵皮石斛水溶性粗多糖得到精制多糖，能最大程度的保持多糖結構不被破壞，可用于鐵皮石斛多糖的結構分析與鑒定。

本技術方案所采用的高速逆流色譜(High-Speed CountercurrentChromatography，HSCCC)是一項新型液-液分配色譜技術，HSCCC不需要固體支撐體，因此采用HSCCC分離天然產物具有重現性好、分離度高、分離量大、操作靈活、分離快速、回收率高和適用范圍廣等特點。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

本發明中一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，包括以下步驟：

S1：使用無水乙醇回流的方式提取鐵皮石斛破壁粉末，棄濾液，收集濾渣，烘干，得到濾渣粉末；

S2：在加熱回流裝置中采用熱水浸提法對S1中得到的濾渣粉末進行水溶性多糖提取，抽濾，收集濾液，合并濃縮，得到多糖濃縮液；

S3：向S2中得到的多糖濃縮液中加入無水乙醇，振蕩，靜置；

S4：對S3中靜置后的液體進行離心并收集沉淀，所得沉淀經無水乙醇多次洗滌，真空干燥，得到多糖沉淀；

S5：將S4中得到的多糖沉淀加入蒸餾水復溶，透析，真空干燥，得鐵皮石斛水溶性粗多糖；