[發明專利]一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法

在審

• 申請號: 202010878614.5
• 申請日: 2020-08-27
• 公開（公告）號: CN111978424A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 孫小玲;王寧寧;孔芒芒;董凡
• 申請（專利權）人: 上海應用技術大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 陳天寶

1.一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：使用無水乙醇回流的方式提取鐵皮石斛破壁粉末，棄濾液，收集濾渣，烘干，得到濾渣粉末；

S2：在加熱回流裝置中采用熱水浸提法對S1中得到的濾渣粉末進行水溶性多糖提取，抽濾，收集濾液，合并濃縮，得到多糖濃縮液；

S3：向S2中得到的多糖濃縮液中加入無水乙醇，振蕩，靜置；

S4：對S3中靜置后的液體進行離心并收集沉淀，所得沉淀經無水乙醇多次洗滌，真空干燥，得到多糖沉淀；

S5：將S4中得到的多糖沉淀加入蒸餾水復溶，透析，真空干燥，得鐵皮石斛水溶性粗多糖；

S6：配制高速逆流色譜溶劑，待混合溶劑分層、兩相分離后進行超聲脫氣，上層作為固定相，下層作為流動相，采用固定相、流動相體積比為α的混合溶劑溶解S5中得到的鐵皮石斛水溶性粗多糖，得到樣品溶液；

S7：設置高速逆流色譜儀的轉速和分離溫度，先以預設流速泵入固定相，充滿固定相后，設定轉向方式，再以預設流速泵入流動相，待兩相溶劑在柱中達到平衡狀態時，樣品溶液由進樣閥進樣，同時啟動流分自動收集器收集流分，流分采用苯酚-硫酸法檢測；

S8：將獲得的相同流分合并，流水透析，真空干燥，得鐵皮石斛水溶性精制多糖。

2.根據權利要求1所述的一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，其特征在于，S1中使用無水乙醇按照料液比1:20-1:30g/mL回流提取鐵皮石斛破壁粉末，回流提取2-3h，濾渣重復處理2-3次；

S2中在加熱回流裝置中采用熱水浸提法按照料液比1:40-1:70g/mL加入濾渣粉末，溫度為40-60℃，提取時間為1-3h，進行水溶性多糖提取，抽濾，收集濾液，合并濃縮；

S3中在濃縮的濾液中加入3-6倍體積的無水乙醇，充分振蕩，靜置12-24h；

S4中采用40-60℃真空干燥；

S5中的透析時間為1-2天。

3.根據權利要求1所述的一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，其特征在于，S6中所述高速逆流色譜溶劑包括聚乙二醇、無水硫酸鎂和水。

4.根據權利要求3所述的一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，其特征在于，所述聚乙二醇、無水硫酸鎂和水的質量比為(12-16％):(14-16％):(68-74％)。

5.根據權利要求4所述的一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，其特征在于，所述聚乙二醇為聚乙二醇600、聚乙二醇800、聚乙二醇1000中的一種或幾種的混合物。

6.根據權利要求5所述的一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，其特征在于，所述逆流色譜溶劑體系為：16％MgSO₄-12％PEG600-72％H₂O(w/w/w)。

7.根據權利要求3所述的一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，其特征在于，S6中配制高速逆流色譜溶劑時，將聚乙二醇和無水硫酸鎂分別溶于水中，在分液漏斗中混合，靜置，待混合溶劑分層，兩相分離后超聲20-60min。

8.根據權利要求1所述的一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，其特征在于，S6中，固定相、流動相體積比為α＝1。

9.根據權利要求1所述的一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，其特征在于，S7中設置高速逆流色譜儀的主機轉速為600-900r/min，分離溫度為25-30℃，先以10-30mL/min的流速泵入固定相，待充滿固定相后，設定轉向方式為正轉，再以0.8-2mL/min的流速泵入流動相，待兩相溶劑在柱中達到平衡狀態時，樣品溶液由進樣閥進樣，同時啟動流分自動收集器收集流分，設置為5min/管，流分采用苯酚-硫酸法檢測。

10.根據權利要求1所述的一種一步純化鐵皮石斛水溶性多糖的方法，其特征在于，S8中將獲得的相同流分合并后，放入截留分子量為3500Da的透析袋中，流水透析，對透析后的溶液旋蒸，醇沉，真空干燥，即得鐵皮石斛水溶性精制多糖。