[發(fā)明專利]一種胸腹水癌細(xì)胞快速檢測(cè)蛋白芯片及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010866140.2
• 申請(qǐng)日: 2020-08-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111999498A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱洲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市森盈生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/574;G01N33/532;G01N33/543
• 代理公司: 廣州德偉專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44436
• 代理人: 黃浩威;何文穎

本發(fā)明提供一種胸腹水癌細(xì)胞快速檢測(cè)蛋白芯片及其制備方法，涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。該胸腹水癌細(xì)胞快速檢測(cè)蛋白芯片及其制備方法，包括載玻片，所述載玻片通過(guò)方形陣列的方式分為多個(gè)微型陣列區(qū)域，每個(gè)所述微型陣列區(qū)域的內(nèi)部均附著有羧基磁珠。該胸腹水癌細(xì)胞快速檢測(cè)蛋白芯片及其制備方法，通過(guò)在載玻片上附著有羧基磁珠，同時(shí)通過(guò)羧基磁珠與膠體金標(biāo)記抗體進(jìn)行交聯(lián)，從而使得羧基磁珠的內(nèi)部包含有膠體金標(biāo)記抗體，將羧基磁珠與膠體金標(biāo)記抗體交聯(lián)后，點(diǎn)樣在每個(gè)微型陣列區(qū)域，從而會(huì)使得每個(gè)微型陣列區(qū)域的內(nèi)部都包含有膠體金標(biāo)記抗體，在使用上，可以有效的提高了胸腹水癌細(xì)胞檢測(cè)精度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別的為一種胸腹水癌細(xì)胞快速檢測(cè)蛋白芯片及其制備方法。

背景技術(shù)

對(duì)胸腹水中癌細(xì)胞進(jìn)行病理診斷是長(zhǎng)期困擾病理學(xué)家的一個(gè)難題，特別是當(dāng)胸腹水中間皮細(xì)胞增生明顯時(shí)，在形態(tài)上常常與分化良好的癌細(xì)胞非常相似，極易混淆，給病理診斷帶來(lái)了很大的困難，即使是具有豐富臨床經(jīng)驗(yàn)的病理學(xué)家也有可能出現(xiàn)誤診，這也是目前國(guó)際細(xì)胞病理學(xué)界的一個(gè)難題。

對(duì)于胸腹水中間皮細(xì)胞與癌細(xì)胞的鑒別，以往最為有效的解決方法是通過(guò)免疫組化染色區(qū)分間皮細(xì)胞和癌細(xì)胞。但是現(xiàn)有技術(shù)中，由于細(xì)胞涂片不象組織切片那樣具有可復(fù)制性，每一張細(xì)胞涂片上面的細(xì)胞成分及分布都不盡相同，因此不能保證每一張涂片上都有癌細(xì)胞，從而在檢測(cè)上會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)的不夠精確，同時(shí)現(xiàn)有的一些抗體，無(wú)法長(zhǎng)時(shí)間的吸附在載玻片上，在使用上，會(huì)無(wú)法對(duì)抗體進(jìn)行精確的使用，降低檢測(cè)精度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供的發(fā)明目的在于提供一種胸腹水癌細(xì)胞快速檢測(cè)蛋白芯片及其制備方法，該解決上述背景技術(shù)中的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：一種胸腹水癌細(xì)胞快速檢測(cè)蛋白芯片，包括載玻片，所述載玻片通過(guò)方形陣列的方式分為多個(gè)微型陣列區(qū)域，每個(gè)所述微型陣列區(qū)域的內(nèi)部均附著有羧基磁珠，所述羧基磁珠的內(nèi)部交聯(lián)有膠體金標(biāo)記的抗腫瘤抗原特異性抗體。

一種胸腹水癌細(xì)胞快速檢測(cè)蛋白芯片的制備方法，包括有如下步驟：

S1、膠體金制備：取1g氯金酸溶于50ml的水中，形成0.01％的氯金酸水溶液，取100mL至250mL燒杯中，加熱至沸騰后，保持沸騰的狀態(tài)下加入2.00～3.00ml的0.1mol/L檸檬酸鈉，當(dāng)氯金酸水溶液的顏色為穩(wěn)定的紅色后停止加熱，待紅色水溶液冷卻至室溫后，用100ml～200ml的蒸餾水恢復(fù)至原體積，即可得到膠體金。

S2、膠體金標(biāo)記抗體：將待標(biāo)記蛋白質(zhì)置入透析袋內(nèi)后直接放入雙蒸餾水中透析，然后在4℃的環(huán)境下離心60分鐘，取上清液。

S3、使用EDCNHS兩步法的羧基磁珠與膠體金標(biāo)記抗體交聯(lián)：利用膠體金標(biāo)記抗體緩沖液用200ml～250ml蒸餾水分餾置換并調(diào)整濃度，將膠體金標(biāo)記抗體緩沖液置換為15mMMES 6.0，將膠體金標(biāo)記抗體濃度調(diào)整至2mg/mL～2.5mg/mL。

S4、在已準(zhǔn)備好的載玻片上點(diǎn)樣：對(duì)羧基磁珠與膠體金標(biāo)記抗體膠交聯(lián)后的樣品進(jìn)行點(diǎn)樣，在每個(gè)微型陣列區(qū)域進(jìn)行點(diǎn)樣，點(diǎn)好的芯片經(jīng)水化烘干后用PBS沖洗，烘干溫度在80°～90°，烘干時(shí)間為10min～15min，再用1％的BSA封閉1小時(shí)，PBS沖洗，將載玻片放入盛有PBS玻璃染色缸中，浸泡5min～7min即可，吹干后即制得胸腹水癌細(xì)胞快速檢測(cè)蛋白芯片。

進(jìn)一步的，將根據(jù)S3中的操作步驟，通過(guò)光電比色法確定標(biāo)記蛋白最適穩(wěn)定量為30～60μg/ml，形成蛋白質(zhì)溶液，調(diào)節(jié)膠體金pH至6.0～6.5，在膠體金中加入最適穩(wěn)定量的蛋白質(zhì)溶液，然后對(duì)溶液進(jìn)行離心，離心后形成沉淀物，將沉淀物溶于PEG 2000緩沖液中，制成膠體金標(biāo)記抗體。

進(jìn)一步的，根據(jù)S3之后，還包括以下步驟：