[發明專利]一種對植物中降糖功能化合物的篩選及分離方法

有效

• 申請號: 202010865223.X
• 申請日: 2020-08-25
• 公開（公告）號: CN111812252B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 王岱杰;施樹云;崔莉;呂翠;張宇;伊夫蒂哈爾·阿里;沙希德·阿齊茲;孫蓉;劉閏平
• 申請（專利權）人: 山東省分析測試中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;A61K31/7034;A61P3/10;C07H15/203;C07H1/08
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 王志坤

1.一種對降糖化合物分離的方法，其特征在于，針對植物中降糖功能化合物的篩選方法得到的降糖化合物，采用逆流色譜制備目標成分峰，按照目標峰收集相應組分，減壓濃縮，得到樣品，利用液相色譜分析分離物，所述降糖化合物為β-熊果苷和6-O-沒食子酰熊果苷；

當植物為巖白菜，葡萄糖苷酶為α-葡萄糖苷酶時，逆流色譜的溶劑系統為：叔丁基甲醚/正丁醇/甲醇/水，體積比為1:3:1:5，上相為固定相，下相為流動相，轉速為800轉/min，流速為2.0 mL/min，檢測波長254 nm，進樣量：1.0 g。

2.如權利要求1所述的對降糖化合物分離的方法，其特征在于，所述的植物中降糖功能化合物的篩選方法為對植物進行萃取得到粗提物，將粗提物與葡萄糖苷酶孵育，酶與混合物通過超濾膜，去除未結合的成分，使酶失活，去除，對剩余組分進行液相色譜分析，即得植物中具有降糖功能化合物；

獲得巖白菜粗提物的步驟包括：將巖白菜浸泡，并用提取劑提取，重復3次；合并所有提取液，旋轉蒸發至干；

所述巖白菜的用量為5kg；

所述提取劑為2×12L的80%乙醇；

提取時間為24 h；

在40℃下旋轉蒸發至干；

將粗提物在4℃的冰箱中儲存備用。

3.如權利要求2所述的對降糖化合物分離的方法，其特征在于，所述葡萄糖苷酶為α-葡萄糖苷酶；

所述α-葡萄糖苷酶與粗提物的孵育步驟包括：將粗提物和α-葡萄糖苷酶在醋酸鹽緩沖液下孵育一段時間，孵育后，將酶與混合物通過超濾膜，離心15分鐘，緩沖液清洗3次，離心，去除未結合的成分，使酶失活，進行液相色譜分析；

醋酸鹽緩沖液的pH 為6-7；

粗提物和α-葡萄糖苷酶25-38°C下孵育25-40分鐘；

所述超濾膜截留分子量為30000 Da；

所述粗提物與α-葡萄糖苷酶體積比為4-6:1；

酶失活步驟包括：酶加入甲醇/水，離心，收集離心液體，

所述甲醇和水的體積比為1:1，pH為3-4。

4.如權利要求3所述的對降糖化合物分離的方法，其特征在于，醋酸鹽緩沖液的pH 為6.8；

粗提物和α-葡萄糖苷酶37°C下孵育30分鐘；

所述粗提物與α-葡萄糖苷酶體積比為5:1；

所述甲醇和水混合物的pH為3.30。

5.如權利要求1或2所述的對降糖化合物分離的方法，其特征在于，液相色譜條件為：5μm, 4.6 mm× 250 mm, i.d.的Waters Symmetry C18 column ，紫外檢測波長254 nm，流速：1.0 mL/min，進樣量：10 μL；流動相A采用水，B采用乙腈，0-5 min, 88%A；5-15 min，88%-70%A；15-20 min，70% A；20-21 min，70%-88%A；21-25 min，12%B。