[發明專利]引物對探針組合產品、試劑盒及其在檢測腸道病毒中的應用

在審

• 申請號: 202010861756.0
• 申請日: 2020-08-25
• 公開（公告）號: CN111961665A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 袁潤余;柯昌文;曾漢日;蘇娟;周平平;武婕;陸靖
• 申請（專利權）人: 廣東省疾病預防控制中心;廣東省公共衛生研究院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/70;C12Q1/6851
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中

1.引物對探針組合產品，其特征在于，包括核苷酸序列分別如SEQ ID NO：1和2所示的上游引物和下游引物；以及

核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的探針。

2.根據權利要求1所述的引物對探針組合產品，其特征在于，所述探針5′端標記熒光發射基團，3′端標記淬滅基團。

3.根據權利要求2所述的引物對探針組合產品，其特征在于，所熒光發射基團選自FAM、HEX、TET、NED、ROX、CY5、CY3、Texas Red、TFAM、SYBR Green I、VIC或JOE中的任一種；

所淬滅基團選自TAMRA、BHQ、Dabcyl、Eclipse或NFQ-MGB中的任一種。

4.試劑盒，其特征在于，包括權利要求1～3任一項所述的引物對探針組合產品。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括無RNA酶的蒸餾水、核酸反應緩沖液、DTT、逆轉錄酶、DNA聚合酶、RNA酶抑制劑、dNTP、微滴生成油、陽性對照、陰性對照和質控溶液中的一種或多種。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括核酸反應緩沖液、DTT、逆轉錄酶，且它們以第一混合液的形式包裝于所述試劑盒中；

所述第一混合液進行使用時，其工作濃度為：

1×核酸反應緩沖液中含有10mM～20mM DTT，15U/μl～25U/μl逆轉錄酶。

7.根據權利要求5或6所述的試劑盒，其特征在于，所述上游引物、下游引物、探針以第二混合液的形式包裝于所述試劑盒中；

所述第二混合液進行使用時，其工作濃度為：

上游引物800nM～1000nM，下游引物800nM～1000nM，探針200nM～300nM。

8.檢測腸道病毒的非診斷目的方法，其特征在于，包括使用權利要求1～3任一項所述的引物對探針組合產品或權利要求4～7任一項所述的試劑盒對待檢測物進行檢測。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法基于一步法數字PCR。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述腸道病毒選自EV71、CA16、CA6、CA10以及CA4中的一種或多種。

11.根據權利要求8～10任一項所述的方法，其特征在于，所述方法用于食品或環境衛生檢驗檢疫。