[發(fā)明專利]一種流感亞單位疫苗及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010860904.7
• 申請(qǐng)日: 2020-08-25
• 公開（公告）號(hào): CN111729082B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張艷;高輝;阮承邁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津中逸安健生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/39
• 分類號(hào): A61K39/39;A61K39/145;A61K9/127;A61K47/26;A61P31/16
• 代理公司: 北京沁優(yōu)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11684
• 代理人: 另婧

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種流感亞單位疫苗及其制備方法。所述的流感亞單位疫苗由PBD?b?PEO/DOTAP和蛋白質(zhì)抗原組成；所述PBD?b?PEO/DOTAP和蛋白質(zhì)抗原的質(zhì)量比為100：1?200：1。本發(fā)明提供的流感亞單位疫苗不僅能在抗體水平上提高數(shù)十倍，而且由于去除了病毒核蛋白和M2蛋白，安全風(fēng)險(xiǎn)性大大降低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種流感亞單位疫苗及其制備方法。

背景技術(shù)

佐劑是指加入疫苗制劑后能促進(jìn)、增強(qiáng)或延長(zhǎng)機(jī)體對(duì)抗原特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。佐劑增強(qiáng)免疫應(yīng)答的機(jī)制尚未完全闡明，不同佐劑也不盡相同，但概括而言，可歸納為：一，佐劑和抗原一起進(jìn)入機(jī)體后，可改變抗原的物理性狀，形成抗原儲(chǔ)存庫(kù)，有利于抗原的緩釋，延長(zhǎng)抗原在體內(nèi)存留的時(shí)間；二，被佐劑吸附的抗原更易被吞噬細(xì)胞吞噬，促進(jìn)對(duì)抗原的處理，易在局部形成炎癥反應(yīng)；三，刺激淋巴細(xì)胞增殖和分化，從而增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答的效應(yīng)；四，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞膜的通透性，促進(jìn)其對(duì)抗原的有效處理和提呈。自從1992年Glenny首次用明礬沉淀白喉類毒素制成抗原免疫豚鼠，取得了較強(qiáng)的免疫效果，鋁佐劑已廣泛應(yīng)用于百白破、乙肝等多種疫苗中，并取得了良好的效果，其安全性和有效性得到了公認(rèn)，成為人用疫苗中使用最廣泛的一種佐劑。然而，隨著鋁佐劑的廣泛應(yīng)用，其不足之處也逐漸暴露。首先鋁佐劑不能凍干；制備的凝膠批與批之間差異大，質(zhì)量難控制且對(duì)佐劑的效果很難做出準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)；更為重要的是，鋁佐劑只能誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，不能誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答；還可誘導(dǎo)產(chǎn)生IgE抗體，增加了發(fā)生超敏反應(yīng)的危險(xiǎn)。而一個(gè)理想的疫苗佐劑應(yīng)具有以下特點(diǎn)：可增強(qiáng)抗原的免疫原性，特別是一些無免疫原性或弱免疫原性的抗原物質(zhì)；可增強(qiáng)機(jī)體的免疫反應(yīng)性，特別是那些免疫機(jī)能低下人群；能誘導(dǎo)產(chǎn)生高親和力的抗體的同時(shí)，可誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答；可引起或增強(qiáng)遲發(fā)型超敏反應(yīng)；對(duì)機(jī)體固有免疫的激活適度，誘導(dǎo)產(chǎn)生較低水平的引起不良反應(yīng)的炎癥因子IL-1、TNF-α等，免疫副反應(yīng)小。

2，3-二油氧基丙基三甲基氯化銨（DOTAP）是一種常用的陽(yáng)離子脂質(zhì)體，由于它與DNA或RNA形成穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞，并將核酸釋放入細(xì)胞內(nèi)，因此一直作為一種真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑用于真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染和DNA疫苗的載體。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，DOTAP還是一種很好的免疫調(diào)節(jié)劑，將多肽或蛋白質(zhì)抗原與DOTAP包裝制備成陽(yáng)離子脂質(zhì)體可明顯提高抗原提呈細(xì)胞對(duì)抗原的提呈能力，同時(shí)與傳統(tǒng)佐劑通過Toll樣受體途徑激活抗原提呈細(xì)胞不同，DOTAP可通過促細(xì)胞分裂原活化蛋白激酶（MAP）途徑激活抗原提呈細(xì)胞，從而誘導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答。該途徑炎癥因子釋放少，炎癥反應(yīng)低。

申請(qǐng)?zhí)枮?01510599234.7的中國(guó)發(fā)明專利公開了一種以陽(yáng)離子脂質(zhì)體DOTAP為佐劑的疫苗及其制備方法。該疫苗由蛋白質(zhì)抗原與陽(yáng)離子脂質(zhì)體DOTAP制備而成，抗原分子與DOTAP脂質(zhì)形成0-500nm±的膠束結(jié)構(gòu)，抗原分子包裹在膠束的親水內(nèi)核中或鑲嵌在膠束膜中。DOTAP作為疫苗佐劑通過與抗原分子形成膠束結(jié)構(gòu)，可明顯提高抗原提呈細(xì)胞對(duì)抗原的攝取和提呈；同時(shí)與傳統(tǒng)佐劑通過Toll樣受體途徑激活抗原提呈細(xì)胞不同，DOTAP可通過促細(xì)胞分裂原活化蛋白激酶（MAP）途徑激活抗原提呈細(xì)胞，從而誘導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答，該途徑炎癥因子釋放少，炎癥反應(yīng)低，因此安全性更好；DOTAP作為疫苗佐劑既可誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答，又可誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，克服了傳統(tǒng)佐劑只能誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答的缺陷。

然而，上述以陽(yáng)離子脂質(zhì)體DOTAP為佐劑的疫苗，一方面在抗體水平方面并未獲得明顯的提高；另一方面，上述以陽(yáng)離子脂質(zhì)體DOTAP為佐劑的疫苗中使用裂解流感疫苗作為抗原，由于裂解疫苗中，并未將非抗原成分（血凝素和神經(jīng)氨酸酶）以外的雜蛋白如病毒核蛋白和M2蛋白進(jìn)行去除，這就意味著陽(yáng)離子脂質(zhì)體DOTAP佐劑在增強(qiáng)疫苗抗原組分的免疫原性以外，放大了雜蛋白的副反應(yīng)，從疫苗安全的角度上看，勢(shì)必存在一定的風(fēng)險(xiǎn)。

發(fā)明內(nèi)容