[發明專利]用于檢測甜瓜疫病抗性的CAPS標記及其應用有效
| 申請號： | 202010860895.1 | 申請日： | 2020-08-25 |
| 公開（公告）號： | CN111763764B | 公開（公告）日： | 2022-08-02 |
| 發明（設計）人： | 王平勇;徐志紅;徐永陽;付楠;趙光偉;賀玉花;孔維虎;張健 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院鄭州果樹研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京動力號知識產權代理有限公司 11775 | 代理人： | 梁艷 |
| 地址： | 450009 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 檢測 甜瓜 疫病 抗性 caps 標記 及其 應用 | ||
1.檢測與甜瓜抗疫病基因緊密連鎖的CAPS標記的試劑在甜瓜抗疫病育種中的應用，所述CAPS標記位于甜瓜基因組3.5.1版本12號染色體第22,902,391bp的位置，表現為G/C多態性，所述CAPS標記以以下引物擴增獲得：
上游引物序列：5’-TATGTAACTGCTATCTCCCTAA-3’；
下游引物序列：5’-GGTTACTGGAGCTTTGGCTC-3’；
將擴增產物以Fau I酶切判斷多態性，酶切后形成一條220bp的條帶和一條55bp的條帶的為抗病材料，僅有275bp條帶的為感病材料；
所述疫病指辣椒疫霉菌引起的，以葉、莖、果實處暗綠色、或黃褐色斑點為特征的甜瓜病害。
2.檢測與甜瓜抗疫病基因緊密連鎖的CAPS標記的試劑在與甜瓜抗疫病性狀相關的甜瓜品種鑒定中的應用，所述CAPS標記以以下引物擴增獲得：
上游引物序列：5’-TATGTAACTGCTATCTCCCTAA-3’；
下游引物序列：5’-GGTTACTGGAGCTTTGGCTC-3’；
將擴增產物以Fau I酶切判斷多態性，酶切后形成一條220bp的條帶和一條55bp的條帶的為抗病材料，僅有275bp條帶的為感病材料；
所述疫病指辣椒疫霉菌引起的，以葉、莖、果實處暗綠色、或黃褐色斑點為特征的甜瓜病害。
3. 根據權利要求1或2任一項所述的應用，其中PCR擴增體系為10μl，包括1μl DNA工作液，1μl 10×Buffer緩沖液，0.4μl dNTPs，0.2μl DNA聚合酶，上、下游引物各0.2μl，用7μlddH2O將總體積補齊至10μl；
擴增程序為：94℃預變性4min；94℃變性30s，55℃退火45s，72℃延伸1min，35個循環；72℃延伸8min；
酶切體系為：0.5μl限制性內切酶Fau I，1μl 10×CutSmart Buffer緩沖液，4μl PCR產物，4.5μl ddH2O將總體積補齊至10μl，55℃酶切4h，65℃滅活20min；
酶切后將酶切產物用7％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，硝酸銀染色后觀察。
4.一種甜瓜育種/品種鑒定用試劑盒，包括權利要求1所述的引物，
以及Fau I酶；
所述甜瓜育種為采用權利要求1所述的CAPS標記進行的甜瓜抗疫病育種；
所述品種鑒定為采用權利要求1所述的CAPS標記進行的與甜瓜抗疫病性狀相關的甜瓜品種鑒定；所述疫病指辣椒疫霉菌引起的，以葉、莖、果實處暗綠色、或黃褐色斑點為特征的甜瓜病害。
5.根據權利要求4所述的試劑盒，其還包含PCR和酶切試劑。
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