[發明專利]一種用于鑒定橡膠草的分子標記組合及其應用

有效

• 申請號: 202010859222.4
• 申請日: 2020-08-24
• 公開（公告）號: CN111961743B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發明（設計）人: 楊玉雙;覃碧;王若旭;劉實忠;王學卓;張繼川;張立群
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院橡膠研究所;北京玲瓏蒲公英科技發展有限公司;北京化工大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

本發明涉及分子標記技術領域，尤其涉及一種用于鑒定橡膠草的分子標記組合及其應用。本發明針對蒲公英屬植物基因中的三個SSR標記ONT21、ONT876和ONT15498設計了鑒別和區分橡膠草的方法，具體可針對這三個SSR標記設計了相應的特異性引物，對待鑒定樣本進行PCR反應后通過擴增出的條帶即可判斷待鑒定材料的物種類型。本發明設計得到的特異性引物具有高度特異性和靈敏度，可以保證擴增結果的準確性。本發明基于三個SSR標記提供的橡膠草鑒定方法可以準確地將橡膠草從其同屬不同種的各種蒲公英中鑒別和區分開，有效防止種間混雜和雜交，在橡膠草的選育和遺傳保護方面具有重大意義。

技術領域

本發明涉及分子標記技術領域，尤其涉及一種用于鑒定橡膠草的分子標記組合及其應用。

背景技術

橡膠草又名俄羅斯蒲公英(Taraxacum?kok-saghyz?Rodin，TKS)?是菊科蒲公英屬的多年生草本植物。研究發現，橡膠草含有4-5％的高質量天然橡膠，主要存在于橡膠草的根內，可以用來制造各種橡膠制品，是現有技術中具備較高經濟價值的產膠植物。

目前，因為生長環境高度重疊，橡膠草多和其他蒲公英屬植物混雜在一起，例如藥用蒲公英(Taraxacum?officinale?F.H.Wigg.，TO)、普通蒲公英(Taraxacum?mongolicumHand.-Mazz，TM)和短角蒲公英(Taraxacum?brevicorniculatum?Korol.，TB)。這些蒲公英屬植物的表型較為接近，單靠表型很難對其進行分辨和鑒定，這給橡膠草野外采集和鑒定都帶來很大的困難。同時，橡膠草和普通蒲公英之間能夠中間雜交，這給橡膠草的種植保存和遺傳保護帶來了很大麻煩。因此，亟待提出能夠快速鑒別和區分橡膠草的方法，以有效防止橡膠草的混雜和雜交，以應用于橡膠草的選育和遺傳保護。

發明內容

為了至少解決一種現有技術存在的問題，本發明提供一種用于鑒定橡膠草的分子標記組合及其應用，通過對三個SSR標記進行檢測，可以準確地鑒別和區分橡膠草和其他蒲公英屬植物。

第一方面，本發明提供一種用于鑒定橡膠草的分子標記組合，所述分子標記組合包括3個SSR標記，為ONT21、ONT876和ONT15498，所述ONT21位于橡膠草基因組染色體區段utg10026_GWHAAAA0002?8121上第17128～17629位，重復序列為AAT，重復7次；所述ONT876位于橡膠草基因染色體組區段utg107_GWHAAAA00025042上第3248?5～32673位，重復序列為AAC，重復5次；所述ONT15498位于橡膠草基因染色體組區段utg3309_GWHAAAA00031419上第325～605位，重復序列為AG，重復6次。

其中，橡膠草基因組染色體區段utg10026_GWHAAAA00028121?基因ID：evm.TU.utg10026.7，橡膠草基因染色體組區段?utg107_GWHAAAA00025042的基因ID：evm.TU.utg107.7，橡膠草基因染色體組區段utg3309_GWHAAAA00031419的基因ID：evm.TU.utg3309.3。

進一步地，所述ONT21的SSR位點位于如SEQ?ID?NO:1所示核苷酸序列的第362～382位，所述ONT876的SSR位點位于如SEQ?ID?NO:2?所示核苷酸序列的第148～162位，所述ONT15498的SSR位點位于如?SEQ?ID?NO:3所示核苷酸序列的第25～36位。

第二方面，本發明提供用于擴增所述分子標記組合的引物組合，所述引物組合包括如下引物：

用于擴增ONT21的引物對：

ONT21-F:GCTGGCATTTATCATCGGTT，

ONT21-R:CATAAACATCAGTAGCACCACTTG；

用于擴增ONT876的引物對：