[發(fā)明專利]一種用于鑒定橡膠草的分子標(biāo)記組合及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010859222.4
• 申請(qǐng)日: 2020-08-24
• 公開（公告）號(hào): CN111961743B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊玉雙;覃碧;王若旭;劉實(shí)忠;王學(xué)卓;張繼川;張立群
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所;北京玲瓏蒲公英科技發(fā)展有限公司;北京化工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

1.一種用于鑒定橡膠草的引物組合，其特征在于，所述引物組合由如下引物對(duì)組成：

用于擴(kuò)增ONT21的引物對(duì)：

ONT21-F:?GCTGGCATTTATCATCGGTT，

ONT21-R:?CATAAACATCAGTAGCACCACTTG；

用于擴(kuò)增ONT876的引物對(duì)：

ONT876-?F:?CTGACTTTGACTGGGGCACT，

ONT876-?R:?CCTCGGTTTCTGGGGTATCT；

用于擴(kuò)增ONT15498的引物對(duì)：

ONT15498-?F:?TGGGGGTGAAAGTGTATCAA，

ONT15498-?R:?TCTTGGAGAATTTGGATGGG。

2.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含權(quán)利要求1所述引物組合。

3.一種鑒定橡膠草的方法，其特征在于，包括：

使用權(quán)利要求1所述引物組合對(duì)待鑒定材料進(jìn)行鑒定，若檢測(cè)到如SEQ?ID?NO:2所示核苷酸序列，且沒有檢測(cè)到如SEQ?ID?NO:1所示核苷酸序列和如SEQ?ID?NO:3所示核苷酸序列，則判斷所述待鑒定材料為橡膠草。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，包括：

提取所述待鑒定材料的DNA，使用權(quán)利要求1所述引物組合進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)椋?/p>

94?℃預(yù)變性5?min；然后94?℃變性30?s，54?℃退火40?s，72?℃延伸45?s，共35個(gè)循環(huán)；最后72?℃延伸10?min，4?℃保存；

所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：

2×PCR?Taq?master?Mix?7.5?μL，10?mM上下游引物各1μL，50ng/μL?DNA模板1μL，ddH₂O4.5?μL。

6.權(quán)利要求1所述引物組合或權(quán)利要求2-5任一項(xiàng)所述方法在蒲公英種屬鑒定中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1所述引物組合或權(quán)利要求2-5任一項(xiàng)所述方法在橡膠草輔助選育中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求1所述引物組合或權(quán)利要求2-5任一項(xiàng)所述方法在橡膠草種質(zhì)資源遺傳保護(hù)中的應(yīng)用。