[發(fā)明專利]一種環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測流感嗜血桿菌的試劑盒及使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010857027.8
• 申請日: 2020-08-24
• 公開（公告）號: CN111850152A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范列英;司玉瑩;李根;陸柳;張雯雁;葉揚(yáng)琴
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市東方醫(yī)院（同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院）
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12R1/21
• 代理公司: 上海驍象知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31315
• 代理人: 林煒

1.一種環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測流感嗜血桿菌的試劑盒，其特征在于，包括如下的引物，

上游外部引物F3，其序列如SEQ ID NO: 1所示，

下游外部引物B3，其序列如SEQ ID N0:2所示，

上游內(nèi)部引物FIP，其序列如SEQ ID N0:3所示，

下游內(nèi)部引物BIP，其序列如SEQ ID NO: 4所示，

環(huán)引物L(fēng)F，其序列如SEQ ID NO: 5所示。

2.如權(quán)利要求1所述的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測流感嗜血桿菌的試劑盒，其特征在于，還包括環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑和熒光染料。

3.如權(quán)利要求1所述的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測流感嗜血桿菌的試劑盒，其特征在于，還包括流感嗜血桿菌陽性質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品。

4.如權(quán)利要求1所述的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測流感嗜血桿菌的試劑盒，其特征在于，還包括作為陰性對照的無核糖核酸酶的去離子水。

5. 如權(quán)利要求2所述的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測流感嗜血桿菌的試劑盒，其特征在于，所述環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑包括LAMP反應(yīng)擴(kuò)增緩沖液、Bst DNA聚合酶和10mM dNTP混合物。

6. 如權(quán)利要求2所述的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測流感嗜血桿菌的試劑盒，其特征在于，所述熒光染料為SYBR Green I熒光染料。

7. 如權(quán)利要求1所述的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測流感嗜血桿菌的試劑盒，其特征在于，所述外引物F3濃度為0.2 M、外引物B3濃度為0.2M、內(nèi)引物FIP濃度為1.6M、內(nèi)引物BIP濃度為1.6M、環(huán)引物L(fēng)F的濃度均為0.6 M。

8.權(quán)利要求1所述的試劑盒的使用方法，其特征在于包括以下步驟：

S1，提取樣本DNA；

S2，將樣本DNA與環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑、熒光染料和引物組進(jìn)行混合得到混合試劑；

S3，將混合試劑置于實(shí)時(shí)熒光檢測儀并將反應(yīng)溫度設(shè)置為63℃反應(yīng)45min；

S4，反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)實(shí)時(shí)熒光曲線判斷樣本中是否含有流感嗜血桿菌。