[發(fā)明專利]一種脫氫表雄酮快速檢測試紙條以及脫氫表雄酮檢測方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010856026.1
• 申請(qǐng)日: 2020-08-24
• 公開（公告）號(hào): CN111896755A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙肅清;楊慧怡;何綺怡;肖煥欣;崔錫平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/74
• 分類號(hào): G01N33/74;G01N33/558;G01N33/543;C07K16/26;C07K16/06
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 許慶勝

本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種脫氫表雄酮快速檢測試紙條以及脫氫表雄酮檢測方法。本發(fā)明公開了一種脫氫表雄酮快速檢測試紙條，將鉑納米花應(yīng)用于試紙條，用于脫氫表雄酮的檢測，利用試紙條來檢測脫氫表雄酮，使得檢測過程簡單方便，檢測時(shí)間更短，靈敏度高，檢測限低，可實(shí)現(xiàn)實(shí)際樣品中脫氫表雄酮的快速檢測。該試紙條的檢測成本低，具有極大的應(yīng)用價(jià)值，市場前景廣闊。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種脫氫表雄酮快速檢測試紙條以及脫氫表雄酮檢測方法。

背景技術(shù)

脫氫表雄酮是腎上腺皮質(zhì)癌靈敏和可信賴的生物標(biāo)記物，因?yàn)楫?dāng)腫瘤用成像的方法還不能確定時(shí)，而脫氫表雄酮的含量會(huì)有顯著的提高。因此，在臨床上檢測脫氫表雄酮對(duì)腎上腺皮質(zhì)癌的診斷有一定的實(shí)際運(yùn)用。因此，針對(duì)脫氫表雄酮的檢測，進(jìn)行初步篩選腎上腺皮質(zhì)癌患者，建立靈敏度高、成本低、快速的免疫分析方法用于輔助腎上腺皮質(zhì)癌的診斷，做到早發(fā)現(xiàn)、早治療是十分有意義的。

臨床上檢測脫氫表雄酮的方法有是放射免疫分析方法，雖然其具有靈敏度高，操作簡單的優(yōu)點(diǎn)，但是放射性物質(zhì)危害操作人員健康。近年來放射免疫分析方法逐漸被其他非放射性測定技術(shù)所取代。臨床上檢測脫氫表雄酮的方法還有利用儀器的方法，例如HPLC、HPLC-MS/MS、GC-MS和LC-MS/MS。雖然使用這些儀器的檢測，靈敏度較高，但是需要訓(xùn)練有素的專業(yè)人員、復(fù)雜的操作以及高成本。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種脫氫表雄酮快速檢測試紙條以及脫氫表雄酮檢測方法，該試紙條檢測過程簡單方便，成本低、檢測時(shí)間更短，靈敏度高，檢測限低，可實(shí)現(xiàn)實(shí)際樣品中脫氫表雄酮的快速檢測。

其具體技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供一種脫氫表雄酮快速檢測試紙條，包括：底板；

所述底板上依次設(shè)置有樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；

所述結(jié)合墊上包被上述鉑納米花標(biāo)記的脫氫表雄酮多克隆抗體，所述硝酸纖維素膜上依次劃有包被抗原的檢測線和羊抗兔IgG抗體的質(zhì)控線。

本發(fā)明將鉑納米花應(yīng)用于試紙條，用于脫氫表雄酮的檢測，利用試紙條來檢測脫氫表雄酮，使得檢測過程簡單方便，檢測時(shí)間更短，靈敏度高，檢測限低，可實(shí)現(xiàn)實(shí)際樣品中脫氫表雄酮的快速檢測。該試紙條的檢測成本低，具有極大的應(yīng)用價(jià)值，市場前景廣闊。

本發(fā)明中，所述吸水紙的長度為20～40mm，優(yōu)選為30mm；硝酸纖維素膜的長度為15～25mm；結(jié)合墊的長度為5～15mm，優(yōu)選為10mm；樣品墊的長度為15～25mm，優(yōu)選為20mm；脫氫表雄酮快速檢測試紙條的寬度為3～5mm；

所述包被抗原的濃度為0.5～2mg/mL，優(yōu)選為1mg/mL，噴涂量為1μL/cm，所述羊抗兔IgG抗體的濃度為0.5～2mg/mL，優(yōu)選為1mg/mL，噴涂量為1μL/cm，所述鉑納米花標(biāo)記的脫氫表雄酮多克隆抗體的濃度為50-100μg/mL，優(yōu)選為80μg/mL，噴涂量為6～10μL/cm，優(yōu)選為1μL/cm；

本發(fā)明中，所述底板為塑膠條；所樣品墊優(yōu)選用玻璃棉制成；所述結(jié)合墊為結(jié)合物釋放層，包被有鉑納米花標(biāo)記的脫氫表雄酮多克隆抗體的纖維層；抗原抗體反應(yīng)發(fā)生在硝酸纖維素膜層，，其上劃有測試線和質(zhì)控線；所述吸水紙為吸水材料，優(yōu)選用吸水濾紙制成；檢測線靠近結(jié)合墊，質(zhì)控線靠近吸水紙，檢測線與質(zhì)控線之間平行且間隔5cm。將樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水紙從左至右依次粘貼固定在底板上，各層交界處纖維互相交叉滲透。

本發(fā)明中，脫氫表雄酮多克隆抗體的制備方法，包括以下步驟：

步驟1：采用碳二亞胺法將脫氫表雄酮與牛血清蛋白進(jìn)行偶聯(lián)，得到免疫原；

步驟2：使用免疫原免疫兔子，取血離心，取上清即為脫氫表雄酮多克隆抗體。