[發明專利]一種脫氫表雄酮快速檢測試紙條以及脫氫表雄酮檢測方法在審
| 申請號： | 202010856026.1 | 申請日： | 2020-08-24 |
| 公開（公告）號： | CN111896755A | 公開（公告）日： | 2020-11-06 |
| 發明（設計）人： | 趙肅清;楊慧怡;何綺怡;肖煥欣;崔錫平 | 申請（專利權）人： | 廣東工業大學 |
| 主分類號： | G01N33/74 | 分類號： | G01N33/74;G01N33/558;G01N33/543;C07K16/26;C07K16/06 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 許慶勝 |
| 地址： | 510060 廣東省*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 脫氫表雄酮 快速 檢測 試紙 以及 方法 | ||
1.一種脫氫表雄酮快速檢測試紙條，其特征在于，包括：底板；
所述底板上依次設置有樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；
所述結合墊上包被有鉑納米花標記的脫氫表雄酮多克隆抗體，所述硝酸纖維素膜上依次劃有包被抗原的檢測線和羊抗兔IgG抗體的質控線；
所述脫氫表雄酮多克隆抗體的制備方法包括以下步驟：
步驟1：采用碳二亞胺法將脫氫表雄酮與牛血清蛋白進行偶聯，得到免疫原；
步驟2：使用所述免疫原免疫兔子，取血離心，取上清即為脫氫表雄酮多克隆抗體。
2.根據權利要求1所述的脫氫表雄酮快速檢測試紙條，其特征在于，步驟2所述免疫的周期為兩周，共免疫五次。
3.根據權利要求1所述的脫氫表雄酮快速檢測試紙條，其特征在于，步驟1具體為：
將脫氫表雄酮半抗原、N-羥基琥珀酰亞胺和碳化二亞胺溶于DMF中反應，得到反應液，將反應液加入含牛血清蛋白的緩沖液中反應，純化，得到免疫原。
4.根據權利要求1所述的脫氫表雄酮快速檢測試紙條，其特征在于，所述鉑納米花標記的脫氫表雄酮多克隆抗體的制備方法包括以下步驟：
步驟1：將聚乙烯比咯烷酮和甘氨酸加入水中，再加入H2PtCl6·6H2O混合，進行水熱反應，得到所述鉑納米花；
步驟2：將所述鉑納米花的水溶液、堿溶液、脫氫表雄酮多克隆抗體進行混合，加入封閉液進行封閉，得到鉑納米花標記的脫氫表雄酮多克隆抗體。
5.根據權利要求4所述的脫氫表雄酮快速檢測試紙條，其特征在于，步驟2所述鉑納米花水溶液：堿溶液：脫氫表雄酮多克隆抗體：封閉液的體積比為1000：6：2：100；
所述鉑納米花水溶液的濃度為1mg/mL，所述堿溶液的濃度為1mg/mL，所述封閉液的濃度為100mg/mL。
6.根據權利要求1所述的脫氫表雄酮快速檢測試紙條，其特征在于，所述包被抗原由脫氫表雄酮和卵清蛋白通過混合酸酐法制得。
7.根據權利要求1所述的脫氫表雄酮快速檢測試紙條，其特征在于，所述包被抗原的制備方法具體為：
將脫氫表雄酮半抗原用甲酰胺溶解后冷卻，加入氯甲酸異丁酯和三正丁胺進行反應，得到反應液，將反應液加入含卵清蛋白的緩沖液中反應，純化，得到包被抗原。
8.根據權利要求7所述的脫氫表雄酮快速檢測試紙條，其特征在于，所述包被抗原的濃度為0.5～2mg/mL，噴涂量為1μL/cm；
所述羊抗兔IgG抗體的濃度為0.5～2mg/mL，噴涂量為1μL/cm；
所述鉑納米花標記的脫氫表雄酮多克隆抗體的濃度為50-100μg/mL，噴涂量為6～10μL/cm。
9.一種脫氫表雄酮快速檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
向權利要求1至8任意一項所述的脫氫表雄酮快速檢測試紙條的樣品墊滴入待測樣品，若檢測線和質控線均顯色，則待測樣品不含脫氫表雄酮，若檢測線不顯色，質控線顯色，則待測樣品含脫氫表雄酮。
10.根據權利要求9所述的脫氫表雄酮快速檢測方法，其特征在于，所述待測樣品的用量為60～100μL。
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