[發明專利]檢測狂犬病毒糖蛋白抗原的酶聯免疫試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202010854943.6
• 申請日: 2020-08-24
• 公開（公告）號: CN111999497B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 董春娜;張蕾;宋芳;肖進;齊鵬;李靜;李鵬宇;劉新月
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535;G01N33/577
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳;李巍

1.一種特異性定量檢測狂犬病毒糖蛋白抗原的酶聯免疫試劑盒，包括捕獲抗體包被的酶聯反應板和酶標記檢測抗體；捕獲抗體和檢測抗體均為與狂犬病毒糖蛋白抗原特異性結合的單克隆抗體RV1；所述與狂犬病毒糖蛋白抗原特異性結合的單克隆抗體含有重鏈可變區RV1-V_H和輕鏈可變區RV1-V_L；所述RV1-V_H和RV1-V_L均由決定簇互補區和框架區組成；所述RV1-V_H和所述RV1-V_L的決定簇互補區均由CDR1、CDR2和CDR3組成；所述RV1-V_H的CDR1的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1的第31~36位氨基酸所示；所述RV1-V_H的CDR2的氨基酸序列如SEQ?IDNo.1的第51~66位氨基酸所示；所述RV1-V_H的CDR3的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1的第99~105位氨基酸所示；所述RV1-V_L的CDR1的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2的第24~40位氨基酸所示；所述RV1-V_L的CDR2的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2的第56~62位氨基酸所示；所述RV1-V_L的CDR3的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2的第95~103位氨基酸所示。

2.根據權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述RV1-V_H的氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?No.1的第1~116位所示；其RV1-V_L的氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?No.2的第1~113位所示。

3.根據權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還包括抗原標準品，所述抗原標準品為狂犬病毒糖蛋白抗原。

4.根據權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述酶聯反應板的獲得方法是將所述捕獲抗體溶于pH?9.6的碳酸鹽溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶聯反應板，每孔50ng~1000ng捕獲抗體，2~8℃下放置8~12小時，使捕獲抗體與酶聯反應板充分結合，然后按照300μl/孔加入含有10mg/ml牛血清白蛋白pH7.4的PBS緩沖液，37℃封閉處理2~3小時，甩干后，待酶聯反應板干燥后4℃密封保存。

5.根據權利要求1所述的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括底物液A、底物液B和終止液；所述底物液A為含0.6mg/ml過氧化氫尿素的檸檬酸磷酸鹽緩沖液，所述底物液B為0.2mg/ml的四甲基聯苯胺溶液，使用時兩者以1:1的比例混合；所述終止液為2mol/L的硫酸溶液。

6.根據權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括樣品稀釋液和20倍濃縮洗滌液；樣品稀釋液為含有5mg/ml酪蛋白的0.01M、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液；20倍濃縮洗滌液為含有濃度為0.8％~1.2％的Tween-20的0.01M，pH?值為7.4的磷酸鹽緩沖液。

7.權利要求1-6中任意一項所述的酶聯免疫試劑盒在特異性定量檢測狂犬病毒糖蛋白抗原中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，待測樣品為疫苗生產過程中的培養液、滅活液、純化液、濃縮液或破乳后的成品疫苗。