[發(fā)明專利]一種糖化血紅蛋白的時間分辨熒光免疫傳感器

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010853959.5
• 申請日: 2020-08-24
• 公開（公告）號: CN114088954A
• 公開（公告）日: 2022-02-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 尹永梅;郗日沫;石洋洋
• 申請（專利權(quán)）人: 南開大學
• 主分類號: G01N33/72
• 分類號: G01N33/72;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于醫(yī)學免疫類領(lǐng)域。特別涉及應用時間分辨熒光免疫傳感器檢測糖化血紅蛋白(HbA1c)的領(lǐng)域。該方法包括以下步驟：功能化Eu³⁺螯合物的合成；增強液的優(yōu)化：HbA1c標準曲線的建立；傳感器的應用。本發(fā)明擬應用硼酸對糖化血紅蛋白的糖基化部分的特異性識別的特點，合成一種能夠特異性識別糖化血紅蛋白的功能化Eu³⁺螯合物；同時，借助抗原抗體的高特異親和作用，構(gòu)建一種靈敏度高、特異性強、方便、快捷的時間分辨熒光免疫傳感器，為糖化血紅蛋白的定量檢測提供一種新的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學免疫類領(lǐng)域。特別涉及應用時間分辨熒光免疫傳感器檢測糖化血紅蛋白的領(lǐng)域。

背景技術(shù)

糖化血紅蛋白(HbA1c)可以反映2-3個月的平均血糖水平，是追蹤II型糖尿病最常用的生物標志物，也是糖尿病早期診斷的重要依據(jù)。由于其重要的臨床研究意義，糖化血紅蛋白的定量檢測亦受到研究者的廣泛關(guān)注。

目前，已經(jīng)報道了多種HbA1c的檢測方法，包括離子交換色譜，硼酸酯親和色譜，電泳法、免疫法和酶法等。其中，高效液相色譜法(HPLC)是HbA1c的標準方法。

雖然HPLC方法比較成熟，但是該方法所需要的樣品量相對較大，血液樣品的前處理也相對比較復雜，需要具備專業(yè)操作經(jīng)驗的工作人員來完成，適用于大型醫(yī)院和研究機構(gòu)。而對于偏遠地區(qū)或者儀器及人員條件不具備的場所，該檢測方法的應用依然存在一定的困難。

基于抗原抗體特異性結(jié)合的免疫法具有靈敏度高、特異性強、樣品量少、操作簡單等優(yōu)點，在HbA1c的檢測領(lǐng)域也有良好的應用。而時間分辨熒光免疫法又因為其獨特的檢測原理，是免疫法中靈敏度更高的一種方法，被認為是最具研究前景的免疫分析方法之一。

基于以上所述，本發(fā)明擬應用硼酸對糖化血紅蛋白的糖基化部分的特異性識別的特點，合成一種能夠特異性識別糖化血紅蛋白的功能化Eu³⁺螯合物，構(gòu)建一種靈敏度高、特異性強、方便、快捷的時間分辨熒光免疫傳感器，為糖化血紅蛋白的定量檢測提供一種新的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明基于硼酸特異性識別糖化血紅蛋白這一原理構(gòu)建了一種糖化血紅蛋白的時間分辨熒光免疫傳感器，該方法不僅靈敏、特異、準確，而且樣品量少，操作簡單，數(shù)據(jù)讀取方便。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

A、包被：將血紅蛋白單克隆抗體稀釋液加入到黑色酶標孔中，3個復孔，孵育，洗滌3次。

B、封閉：向上述已包被的酶標板中加入封閉液，孵育，洗滌3次。

C、加樣：向上述已封閉完成的酶標孔中加入HbA1c稀釋液，孵育，洗滌3次。

D、加功能化的Eu³⁺螯合物：向上述酶標孔中加入功能化的Eu³⁺螯合物，孵育，洗滌3次。

E、加酸性增強液：向上述酶標板中加入酸性增強液，孵育，檢測熒光信號。

所述步驟A中的血紅蛋白單克隆抗體的濃度為1μg/mL，加入量為100μL。

所述步驟A中的血紅蛋白單克隆抗體的孵育條件為37℃，2h。

所述步驟B中封閉液的組成為BSA的Tris-HCl緩沖液。

所述步驟B中封閉液加入體積為200μL，孵育條件為37℃，2h。

所述步驟C中樣品溶液的體積為100μL，孵育條件為37℃，0.5h。

所述步驟D中功能化Eu³⁺螯合物為Eu-DTPA-2APBA，即連有苯硼酸的Eu³⁺螯合物，其結(jié)構(gòu)式為式(1)所示：