[發明專利]一種覆盆子多酚指紋圖譜的建立方法

有效

• 申請號: 202010853333.4
• 申請日: 2020-08-23
• 公開（公告）號: CN112129851B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 李小白;孫健;金亮;任江劍
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

1.一種覆盆子多酚指紋圖譜的建立方法，其特征在于，步驟是：

1）成分提取：0.5克覆盆子待測樣品液氮速冷并使用勻漿機粉碎，加入5毫升70%甲醇水溶液，搖勻后超聲在60攝氏度下處理50分種，離心后上清經0.45μm微孔濾膜過濾，即得待測樣品提取液；

2）步驟1得到的待測樣品提取液用超高效液相色譜分析，采用ACQUITY UPLC HSS T3柱，孔徑：1.8 μm, 直徑×長：2.1 × 150 mm，進樣體積5微升進行分離，得到UPLC分離色譜圖；

測定待測樣品提取液分離充分面積大于600的成分峰,測試條件：進樣體積5μL，流速為0.3mL/min，柱溫為50℃；檢測波長為360nm；流動相A 為0.1%甲酸-水；流動相B為0.1%甲酸-乙腈，線性梯度為0min：5%流動相B；5min：10%流動相B；25min：25%流動相B；37min：95%流動相B；

3）UPLC偶聯一級質譜為AB TripleTOF 5600plus System，二級質譜為IDAauto-MS2，用于獲取UPLC分離的待測樣品提取液中各成分及其碎片離子的質荷比；

4）根據步驟3）獲取的待測樣品提取液的成分及其碎片離子的質荷比數據推斷基團組成，進行數據庫比對和標準品驗證，確定各成分的物質；確定的10種多酚化合物成分包括鞣花酸戊糖苷、肉桂糖苷、鞣花酸、蘆丁、異槲皮素、山奈酚-3-O-蕓香糖苷異構體、山奈酚己糖、山奈酚-3-O-蕓香糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、椴樹苷；

5) 多酚指紋圖譜建立

對于多個不同來源的待測樣品進行步驟1）、步驟2），

比較不同來源待測樣品的UPLC分離色譜圖中的主要峰，確定8個含量較高且保留時間相對穩定的共有峰作為指紋圖譜特征峰，包括鞣花酸戊糖苷、肉桂糖苷、鞣花酸、山奈酚-3-O-蕓香糖苷異構體、山奈酚己糖、山奈酚-3-O-蕓香糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、椴樹苷，

誤差控制在0.01%-0.05%；一級質譜的質譜條件為：MS 陰離子模式，源電壓源是-4.5kV,源溫度550℃，氣體1為空氣，和天然氣2均設置為50 psi, 氣簾氣為氮氣，壓力設置為35psi，最大允許誤差設置為±5 ppm，減光電位為100v;碰撞能10v；

對于MS/MS采集模式，碰撞能量設置為40±20 V，離子釋放量設置為67，離子釋放寬度設置為25；

二級質譜的質譜條件為：

以IDA為基礎的auto-MS2對響應最強的8個代謝物離子進行全掃描，前體離子和產物離子的m/z掃描范圍分別設定為100 - 2000 Da和50 - 2000 Da，質量校準在每次分析之前自動執行，使用自動校準傳送系統。

2.如權利要求1所述的建立方法，其特征在于，

所述的多酚指紋圖譜的應用：指紋圖譜特征峰成分對應的含量作為指紋參數用于計算Mahalanobis距離，Mahalanobis距離和典型判別分析(Canonical discriminantanalysis) 采用SAS 9.1的CANDISC程序運算的，最終用Ward的方法進行聚類，在系統聚類分析的模塊下構建系統樹 ，此系統樹可用于后續的偽品鑒定以及材料來源的分析。