[發(fā)明專利]一種覆盆子多酚指紋圖譜的建立方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010853333.4
• 申請日: 2020-08-23
• 公開（公告）號: CN112129851B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發(fā)明（設計）人: 李小白;孫健;金亮;任江劍
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

本發(fā)明公開了一種覆盆子多酚指紋圖譜的建立方法。基于超高效液相色譜（UPLC）在特定條件下成功分離了多種多酚類物質(zhì)，并利用串聯(lián)質(zhì)譜在特定條件下鑒定物質(zhì)成分。選取其中8含量高、保留時間穩(wěn)定且不同來源覆盆子共有特征峰作為指紋圖譜，此指紋圖譜不但具有檢測高效、而且分辨能力強，能最大限度反映材料之間的差異，因此可用于中藥材的偽品的鑒定和材料的來源分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學分析檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種覆盆子多酚指紋圖譜的建立方法。

背景技術(shù)

多酚類物質(zhì)是重要的保健或藥效成分，廣泛分布于水果和中草藥中，其具有抗氧化和清除體內(nèi)自由基、抗炎抑菌、抑制惡性腫瘤等作用。其中許多重要成分和含量作為評價中藥材和保健食品的檢測指標。

覆盆子多酚種類繁多，有些化合物極性和結(jié)構(gòu)相近難以分離定量，還有一些極性和結(jié)構(gòu)差異較大，需要較長的時間和較為復雜的條件來分離。先前的高效液相色譜法（HPLC）對此分離效果較差，很難對覆盆子的多酚各成分進行有效分離，而超高效液相色譜（UPLC）在HPLC的基礎(chǔ)上增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量，增加有效分離各成分的可能性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種覆盆子多酚指紋圖譜的建立方法。

一種覆盆子多酚指紋圖譜的建立方法，步驟是：

1）成分提?。?.5克覆盆子待測樣品液氮速冷并使用勻漿機粉碎，加入5毫升70%甲醇水溶液，搖勻后超聲在60攝氏度下處理50分種，離心后上清經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，即得待測樣品提取液；

2）步驟1得到的待測樣品提取液用超高效液相色譜（UPLC）分析，采用ACQUITYUPLC HSS T3柱，孔徑：1.8 μm, 直徑×長：2.1 × 150 mm，進樣體積5微升進行分離，得到UPLC分離色譜圖；

測定待測樣品提取液分離充分的成分峰,面積大于600，測試條件：進樣體積5μL，流速為0.3mL/min，柱溫為50℃；檢測波長為360nm；流動相為0.1%甲酸-水(A)和0.1%甲酸-乙腈(B)，線性梯度為0/5、5/10、25/25、37/95 (min/B%)；

3）UPLC偶聯(lián)一級質(zhì)譜AB TripleTOF 5600plus System和二級質(zhì)譜IDA為基礎(chǔ)的auto-MS2，

用于獲取UPLC分離的待測樣品提取液中各成分及其碎片離子的質(zhì)荷比；

4）根據(jù)步驟3）獲取的待測樣品提取液的成分及其碎片離子的質(zhì)荷比數(shù)據(jù)推斷基團組成，進行數(shù)據(jù)庫比對和標準品驗證，確定各成分的物質(zhì)；

5) 多酚指紋圖譜建立

對于多個不同來源的待測樣品進行步驟1）、步驟2），

比較不同來源待測樣品的UPLC分離色譜圖中的主要峰，確定8個含量較高且保留時間相對穩(wěn)定的共有峰作為指紋圖譜特征峰，誤差控制在0.01%-0.05%。

一級質(zhì)譜的質(zhì)譜條件為：MS 陰離子模式，源電壓源是-4.5 kV,源溫度550℃，氣體1空氣和天然氣2設置為50 psi, 氣簾氣氮氣的壓力設置為35 psi，最大允許誤差設置為±5 ppm，減光電位為100v;碰撞能10v；

對于MS/MS采集模式，碰撞能量設置為40±20 V，離子釋放量設置為67，離子釋放寬度設置為25。

二級質(zhì)譜的質(zhì)譜條件為：

以IDA為基礎(chǔ)的auto-MS2對響應最強的8個代謝物離子進行全掃描(1s)，前體離子和產(chǎn)物離子的m/z掃描范圍分別設定為100 - 2000 Da和50 - 2000 Da，質(zhì)量校準在每次分析之前自動執(zhí)行，使用自動校準傳送系統(tǒng)。