[發明專利]用于西尼羅河病毒檢測的試劑、試劑盒、檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202010852040.4
• 申請日: 2020-08-21
• 公開（公告）號: CN111996291A
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 吳江;林彥星;黃超華;史衛軍;花群義;阮周曦;賈鵬;曹琛福;曾少靈;林永濤
• 申請（專利權）人: 深圳海關動植物檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 李小焦;彭家恩

本申請公開了一種用于西尼羅河病毒檢測的試劑、試劑盒、檢測方法及應用。本申請試劑包括引物對和探針，引物對上/下游引物分別為Seq ID No.1和2所示序列，探針為Seq ID No.3所示序列或其反向互補序列；探針中，第30堿基修飾熒光基團6?FAM?Dt，第31堿基替換為堿基類似物dSpacer，第34堿基修飾熒光淬滅基團BHQ1?dT，3’末端修飾C3 Spacer。本申請試劑，能通過RT?RPA對WNV進行敏感、特異、高效檢測，耗時短、靈敏度高、硬件設備要求低，不需復雜的樣本處理，特別適于現場快速檢測；這對WNV快速防控，防止疫情傳播，減少經濟損失，保障畜牧業養殖生產安全具有重大意義。

技術領域

本申請涉及西尼羅河病毒檢測領域，特別是涉及一種用于西尼羅河病毒檢測的試劑、試劑盒、檢測方法及應用。

背景技術

西尼羅河病毒(WestNile virus，WNV)是一種蟲媒病毒，屬于黃病毒科黃病毒屬，是一種單鏈RNA病毒，可影響鳥類、人類和馬。該疾病最大的危害就是造成人和馬患上致命的腦炎，雞、鳥等小型動物死亡等，會導致嚴重的公共衛生問題。因此，快速準確的診斷西尼羅河病毒對疫病的防控意義重大。

野鳥是西尼羅河病毒的自然宿主，庫蚊是主要傳播媒介，病毒通過“鳥—蚊—鳥、人、其它動物”的生物傳播鏈在自然界生存。1937年，該病毒在西尼羅河地區的烏干達被發現，因此而得名。2000年，在以色列中部和北部發現的439例神經侵襲性疾病，其中29人死亡。2017年，美國發生的2000多例西尼羅病毒感染病例，其中接近2/3的患者表現為嚴重的神經侵襲性疾病。該病對人類的健康和畜牧業的發展造成了極大的危害，世界衛生組織已將其列為當前全球的重大流行病之一。

隨著經濟發展，頻繁的國際旅行、候鳥的遷徙及進口動物及動物產品貿易，各國都存在WNV的傳入風險。為防止西尼羅病毒的病毒株從國外傳入我國，建立一種簡便、快速、準確的診斷方法，有利于盡早切斷病原傳播，降低經濟損失。

目前，該病的病原檢測方法包括病毒分離試驗、RT-PCR、熒光定量PCR、巢式PCR、LAMP、二代測序技術等，抗體檢測方法有ELISA、蝕斑減少中和試驗(PRNT)。但這些檢測技術方法操作復雜、對操作人員的技術要求高、檢測時間長、難以適用于現場檢測。因此亟需建立一種能夠更好的適用于現場快速檢測的WNV檢測方法，以防止WNV傳入或擴散，避免嚴重的公共衛生問題。

發明內容

本申請的目的是提供一種新的用于西尼羅河病毒檢測的試劑、試劑盒、檢測方法及應用。

本申請采用了以下技術方案：

本申請的一方面公開了一種用于西尼羅河病毒檢測的試劑，該試劑包括引物對和探針，引物對的上游引物為Seq ID No.1所示序列，引物對的下游引物為Seq ID No.2所示序列，探針為Seq ID No.3所示序列或者Seq ID No.3所示序列的反向互補序列；

Seq ID No.1：5’-CCTGATTGAATTGGAACCACCCTTTGGAGACTCAT-3’

Seq ID No.2：5’-AGTCCCAAGCTGTATCTCCTAGGGCGGCTAATCTC-3’

Seq ID No.3：

5’-CATAGTGGTGGGCAGAGGAGAACAACAGATTAATCACCATTGGCACAAGTC-3’

Seq ID No.3所示序列的探針中，第30個堿基修飾熒光基團6-FAM-Dt，第31個堿基替換為堿基類似物dSpacer，第34個堿基修飾熒光淬滅基團BHQ1-dT，3’末端修飾C3Spacer。