[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用白酒糟生產(chǎn)膠凍樣芽孢桿菌的技術(shù)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010848278.X
• 申請(qǐng)日: 2020-08-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111793589B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭楠;常章兵;田建平;梁運(yùn)祥
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 四川潤(rùn)格生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C12N1/38;C12R1/07
• 代理公司: 北京盛詢(xún)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11901
• 代理人: 陳巍

本發(fā)明公開(kāi)了一種利用白酒糟生產(chǎn)膠凍樣芽孢桿菌的技術(shù)方法，所述方法包括：(1)菌種活化：將放置在4℃冰箱內(nèi)保藏的膠凍樣芽孢桿菌轉(zhuǎn)接至固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，恒溫培養(yǎng)；(2)液體培養(yǎng)：沖洗固體平板，將活化后菌種轉(zhuǎn)接至液體種子培養(yǎng)基中，按照液體基礎(chǔ)培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)。本發(fā)明所述方法能顯著提高膠凍樣芽孢桿菌的菌體數(shù)和芽孢率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種利用白酒糟生產(chǎn)膠凍樣芽孢桿菌的技術(shù)方法。

背景技術(shù)

膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)是一種能分解硅酸鹽礦物的細(xì)菌，國(guó)內(nèi)一些學(xué)者也把它稱(chēng)為硅酸鹽細(xì)菌。長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)于這個(gè)種的特性一直有不同的意見(jiàn)，因此其分類(lèi)地位、名稱(chēng)直到1998年才得到國(guó)際上承認(rèn)。其能分解長(zhǎng)石、云母等鋁硅酸鹽類(lèi)原生態(tài)礦物，使土壤中難溶性K、P、Si等轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄缘模┲参锷L(zhǎng)利用。同時(shí)還可以產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì)促進(jìn)植物生長(zhǎng)。大量田間試驗(yàn)表明，以膠凍樣芽孢桿菌為主要成分的生物鉀肥在缺鉀土壤上對(duì)各種農(nóng)作物表現(xiàn)出較好的增產(chǎn)效果。我國(guó)鉀肥資源嚴(yán)重不足，國(guó)家每年需大量外匯進(jìn)口無(wú)機(jī)鉀肥。因此，開(kāi)發(fā)利用生物鉀肥不僅可以保護(hù)生態(tài)環(huán)境，也能帶來(lái)較好的經(jīng)濟(jì)效益。近年來(lái)也有研究表明，該菌產(chǎn)生的莢膜多糖是很好的生物絮凝聚劑，0.1ml/L的多糖對(duì)高嶺土可起到99.6％的絮凝效果。但目前對(duì)于膠凍樣芽孢桿菌的研究主要集中在解鉀強(qiáng)度及實(shí)際應(yīng)用效果方面，而對(duì)于發(fā)酵條件的研究并不多。

微生物菌劑，絕大部分產(chǎn)品都是以活菌發(fā)揮作用的，有效的活菌數(shù)是衡量微生物菌劑品質(zhì)的重要指標(biāo)。產(chǎn)品中必須含有相當(dāng)數(shù)量的活菌數(shù)才能達(dá)到相應(yīng)的效果。我國(guó)對(duì)各種正式批準(zhǔn)生產(chǎn)的菌劑都有明確的有效活菌數(shù)量和用量的規(guī)定。但是微生物菌劑隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，活菌數(shù)量不斷減少，在一定時(shí)期內(nèi)，其有效活菌數(shù)降低，影響微生物制劑的使用效果。芽孢桿菌因其獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)體-芽孢-營(yíng)養(yǎng)體的生活周期史，及其具有抵抗熱、干燥、輻射、酸、堿等不良環(huán)境的生理特性，能延長(zhǎng)微生物菌劑的保存期。因此，研究提高膠凍樣芽孢桿菌芽孢率的發(fā)酵方法，對(duì)延長(zhǎng)微生物菌劑的保藏期，具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的提供一種進(jìn)一步降低成本、提高發(fā)酵單位、解決現(xiàn)有技術(shù)中發(fā)酵方法芽孢率低的問(wèn)題的發(fā)酵方法。

本發(fā)明提供一種利用白酒糟生產(chǎn)膠凍樣芽孢桿菌的技術(shù)方法，包括以下步驟：

(1)菌種活化：將放置在4℃冰箱內(nèi)保藏的膠凍樣芽孢桿菌轉(zhuǎn)接至含有白酒糟的固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，恒溫培養(yǎng)；所述白酒糟為經(jīng)過(guò)干燥處理過(guò)的白酒糟；

(2)液體培養(yǎng)：沖洗固體平板，將活化后菌種轉(zhuǎn)接至液體種子培養(yǎng)基中，按照液體基礎(chǔ)培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟(1)中固體培養(yǎng)基的成分，按質(zhì)量份數(shù)計(jì)，包括營(yíng)養(yǎng)瓊脂30-50份，無(wú)水氯化鈣0.05-0.15份，七水硫酸鎂0.1-0.5份，四水氯化錳0.2-0.7份，氯化鈉0.5-1.5份，硫酸錳0.05-0.15份、白酒糟100-150份。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟(1)中接種量為4％。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，固體培養(yǎng)基的初始pH為6，培養(yǎng)溫度為40-60℃，培養(yǎng)20-30min。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟(2)中液體種子培養(yǎng)基的成分，按質(zhì)量份數(shù)計(jì)，包括營(yíng)養(yǎng)肉湯150-200份，蜜糖50-80份，無(wú)水氯化鈣0.6-0.8份，七水硫酸鎂1-4份，硫酸錳2-5份，磷酸二氫鉀0.15-0.4份，蒸餾水100-150份。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，液體基礎(chǔ)培養(yǎng)條件為：轉(zhuǎn)速100-150r/min，溫度為50-70℃，初始pH為5.5。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟(2)中接種量為2％，裝液量為100mL/250mL，培養(yǎng)3-5d。

本發(fā)明公開(kāi)了以下技術(shù)效果：